章魚(yú)內(nèi)臟提取酸性蛋白酶的工藝研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10385分類(lèi)號(hào)：研究生學(xué)號(hào)：1300507086密級(jí)：章魚(yú)內(nèi)臟提取酸性蛋白酶的工藝研究章魚(yú)內(nèi)臟提取酸性蛋白酶的工藝研究ExtractionTechnologyofAcidProteasefromOctopusViscera作者姓名：張秀娟張秀娟指導(dǎo)教師：黃惠莉黃惠莉教授教授學(xué)科：生物化工生物化工研究方向：海洋資源開(kāi)發(fā)與利用海洋資源開(kāi)發(fā)與利用所在學(xué)院：化工學(xué)院化工學(xué)院論文提交日期：二零一六二零一六年四月一日摘要I摘要由于人們對(duì)

2、海產(chǎn)品需求量的增大，大量的下腳料被拋棄或低值處理，造成了資源及環(huán)境問(wèn)題。另外，生產(chǎn)生活中對(duì)酶的需求也不再滿足于從陸生動(dòng)植物身上提取，而逐漸放眼于利用海洋特別是深海資源中提取制備酶制劑。而在章魚(yú)下腳料利用方面，提取純化酸性蛋白酶方面的探討很少。章魚(yú)中的蛋白酶含量高、活性強(qiáng)，是提取酸性蛋白酶的優(yōu)良原料。所以本文主要研究從章魚(yú)內(nèi)臟提取制備酸性蛋白酶，以提高章魚(yú)副產(chǎn)物的利用率，達(dá)到變廢為寶的目的，并為后續(xù)的研究提供可參考依據(jù)。1.對(duì)章魚(yú)內(nèi)臟的主

3、要成分分析，粗蛋白質(zhì)的含量為16.0%、水分為75.8％、灰分為2.6％、脂肪為2.6％，說(shuō)明章魚(yú)內(nèi)臟可作為提取酶等含氮類(lèi)物質(zhì)的材料。2.以章魚(yú)內(nèi)臟為原料提取酸性蛋白酶，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)及響應(yīng)面法優(yōu)化，獲得最佳提取方案為：pH值5.0、溫度30℃、時(shí)間2.5ｈ、料液比1:5（內(nèi)臟與緩沖液配比），由此得到的粗酶液酶活為917.2nkatg內(nèi)臟，對(duì)應(yīng)比活為17.4nkatmg；粗酶液中大部分為酸性蛋白酶，占總量的76.0％。3.粗酶液的初步分

4、離結(jié)果為：（1）鹽析：硫酸銨飽和度為80%，純化倍數(shù)最大值為1.1，酶活回收率為76.0%，蛋白質(zhì)回收率為69.0%。（2）有機(jī)溶劑輔助鹽析：鹽析過(guò)程中加入2%無(wú)水乙醇時(shí)，其純化倍數(shù)最大2.2，酶活回收率為93.2%，蛋白回收率為51.0%。（3）膜分離純化倍數(shù)為6.4，酶活回收率為28.8%，蛋白回收率為4.5%。4.通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)離子交換條件進(jìn)行優(yōu)化，得到的最優(yōu)方案為：pH值為7.0的緩沖液，上樣量為經(jīng)膜分離處理后濾液10mL，流速

5、3mLmin，洗脫液中NaCl濃度為0.5molL，由此得到的產(chǎn)品純化倍數(shù)為16.5，相對(duì)于抽提粗液的酶活回收率為23.0%，蛋白回收率為1.5%。5.章魚(yú)源酸性蛋白酶初步應(yīng)用實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：（1）酶解馬鮫魚(yú)皮制備抗氧化物質(zhì)：經(jīng)酸性蛋白酶酶解后的酶解液具有還原力、對(duì)羥.基的清除率為58.1%、超氧陰離子自由基的清除率為40.6%；（2）酸性蛋白酶酶解制備馬鮫魚(yú)皮膠原蛋白提取率是29.5%。本課題從章魚(yú)內(nèi)臟中得到的酸性蛋白酶，在制備方面十分