豬屠宰副產(chǎn)物中胃蛋白酶和胃膜素分離提取工藝研究.pdf

1、隨著我國(guó)生豬養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，生豬屠宰副產(chǎn)物隨之大量增加，只有這些副產(chǎn)物的深加工跟上養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展步伐，生豬養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益才能提高、資源的浪費(fèi)才能減少，而生化制藥是綜合利用生豬屠宰副產(chǎn)物的有效途徑之一，因此，本試驗(yàn)研究利用生豬屠宰副產(chǎn)物制取胃蛋白酶和胃膜素。
　　 豬胃黏膜可分為胃底部黏膜和幽門(mén)區(qū)黏膜兩部分，研究證明，胃底部黏膜的胃蛋白酶活力約為幽門(mén)區(qū)黏膜的3.05倍，因此，將胃底部黏膜作為制取胃蛋白酶的原料；試驗(yàn)證明，幽門(mén)區(qū)黏

2、膜含有胃膜素，因此將幽門(mén)區(qū)黏膜用來(lái)制取胃膜素。
　　 胃蛋白酶的制取可分為提取、分離、純化三步。以豬胃底部黏膜為原料，優(yōu)化胃蛋白酶的酸法浸提工藝，選取液料比、提取溫度、鹽酸體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間4個(gè)因素，對(duì)吸光度進(jìn)行評(píng)價(jià)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)優(yōu)化胃蛋白酶的提取工藝，結(jié)果表明，最佳提取條件為液料比0.76:1(mL/g)、鹽酸體積分?jǐn)?shù)4.01％、提取溫度44.9℃、提取時(shí)間1.49h；然后探索PEG/(NH

3、4)2SO4雙水相萃取和殼聚糖沉淀相結(jié)合分離豬胃蛋白酶，并對(duì)兩方法的主要影響因素進(jìn)行考察。研究表明，PEG-1000質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％、(NH4)2SO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％組成的雙水相體系最佳，在此條件下，豬胃蛋白酶的分配系數(shù)K為75.3、萃取率y為98.9％，純化倍數(shù)為3.25；對(duì)上述雙水相系統(tǒng)的上相溶液進(jìn)行殼聚糖沉淀，最佳沉淀?xiàng)l件為：殼聚糖添加量為2.5mg/mL上相溶液、復(fù)合pH5.9，此時(shí)，豬胃蛋白酶純化倍數(shù)達(dá)7.83，比僅雙水相萃

4、取的純化倍數(shù)提高了4.58；最后用DEAE-纖維素離子交換層析法純化豬胃蛋白酶，經(jīng)透析、真空冷凍干燥得到胃蛋白酶粉末。經(jīng)檢測(cè)，1g所得產(chǎn)品中含胃蛋白酶活力為9145.9單位（大于3800單位），符合中華人民共和國(guó)藥典二部（2005年版）的規(guī)定。
　　 以豬幽門(mén)區(qū)黏膜為原料，優(yōu)化胃膜素的提取工藝。以鹽酸溶液為提取液，選取液料比、提取溫度、鹽酸體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間4個(gè)因素，對(duì)胃膜素得率進(jìn)行評(píng)價(jià)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)