大腸桿菌脂多糖的提取純化及活性分析.pdf

1、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),又稱內(nèi)毒素,是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分,能引起敗血性休克和多器官功能衰竭綜合癥。脂多糖由類脂A、核心寡糖和O-抗原三部分組成。其中,類脂A是脂多糖的活性部分,O抗原的結(jié)構(gòu)組成高度變化,這種變化決定了脂多糖的多樣性。而脂多糖的多樣性與其鱟試劑檢測活力之間的關(guān)系是我們非常想了解的。本文通過提取純化不同致病能力大腸桿菌中的脂多糖,使用鱟試劑測定它們的活力,并比較它們活力的差異,了解不

2、同菌株致病力的強(qiáng)弱與其脂多糖的鱟試劑活力測定之間的關(guān)系,為進(jìn)一步比較不同脂多糖引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的差異提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),為人們研究和治療脂多糖引起的各種疾病提供新的思路和方法。 本文選取不同致病能力的21種大腸桿菌,采用熱酚-水法提取它們的脂多糖,純化后的脂多糖用SDS-PAGE電泳和銀染檢測。得到脂多糖的蛋白含量除O157:H7為1.08％外,其余均低于1％；核酸含量介于1.46％和17.11％之間；產(chǎn)率在6.16 mg/g和34

3、.38 mg/g之間；用鱟試劑測定的活力從107到1013 EU/mg不等。 本文還構(gòu)建了含有基因啟動子序列的六個報告基因質(zhì)粒,這些基因包括IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、iNOS和IRF-3,其中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α是脂多糖引起的MyD88依賴性信號通路中的炎癥因子,iNOS和IRF-3是MyD88非依賴性信號通路中的重要調(diào)節(jié)蛋白。這些報告基因質(zhì)粒的構(gòu)建為研究不同脂多糖刺激下相應(yīng)基因的表達(dá)做好