血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在急性肺損傷中的表達(dá)及作用機制.pdf

1、第一部分 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在急性肺損傷中的表達(dá)
　　 目的：探討脂多糖（LPS）吸入導(dǎo)致急性肺損傷（ALI）模型中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）表達(dá)的變化情況及其與肺損傷程度的關(guān)系。方法：將30只雄性BALB/c小鼠隨機分為6組（n=5），分別為LPS 4h組、LPS 24h組、LPS 48h組、PBS 4h組、PBS 24h組和PBS 48h組，麻醉后行氣管內(nèi)插管，LPS組吸入LPS（3mg/kg），PBS組吸入等容量磷

2、酸鹽緩沖液（PBS）作為對照。在預(yù)定的時間點（4h, 24h, 48h）左心室穿刺，行血氣分析；保留血漿檢測VEGF水平；肺泡灌洗液（BALF）檢測VEGF水平和蛋白定量；留取肺組織行病理學(xué)檢測、免疫組化檢測以及實時定量PCR檢測VEGF mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：與PBS各組相比，LPS組均出現(xiàn)明顯的肺損傷改變，其中LPS 24h組的病理變化最為明顯，肺損傷評分顯著增加（1.5vs12, P＜0.001）；與PBS 24h組相比：LPS

3、 24h組出現(xiàn)明顯低氧血癥（97.27±8.96 mmHgvs64.24±10.53 mmHg, P＜0.001）、二氧化碳潴留（37.83±5.75 mmHgvs49.00±9.19 mmHg, P＜0.05）和酸中毒（7.42±0.07vs7.17±0.05, P＜0.001）；BALF中蛋白定量（183.28±15.58 μg/mlvs569.17±114.68 μg/ml, P＜0.05）和VEGF（32.45±6.57 pg/

4、mlvs160.14±34.25 pg/ml, P＜0.05）均明顯增加，且二者呈正相關(guān)（r=0.676, P＜0.001）；血漿（12.44±4.05 pg/mlvs31.53±1.96 pg/ml, P＜0.05）和肺組織中VEGF升高，肺組織中VEGF mRNA表達(dá)也升高（0.24±0.07vs0.55±0.10, P＜0.05）。結(jié)論：LPS吸入成功地建立了ALI模型，ALI模型的血漿、肺組織和BALF中VEGF水平明顯升高，B

5、ALF中蛋白定量與VEGF呈正相關(guān)，提示VEGF可能通過增加呼吸膜的通透性參與ALI的病理生理過程。
　　 第二部分 抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子治療對急性肺損傷的治療作用
　　 目的：研究抗VEGF治療對ALI病理生理變化的影響以及抗VEGF對ALI可能存在的治療作用。方法：將60只雄性BALB/c小鼠隨機分為4組，分別為PBS組、sFlt組、LPS組和LPS+sFlt組，再按時間點將每組動物分為3個亞組（4h組、24h組

6、、48h組），所有動物麻醉后行氣插管，LPS組和LPS+sFlt組吸入LPS（3mg/kg），PBS組和sFlt組吸入等容量PBS，然后sFlt組和LPS+sFlt組從尾靜脈給予50μg/kg的sFlt-1（VEGF的可溶性受體，僅有與VEGF結(jié)合能力而無信號傳導(dǎo)作用）進(jìn)行抗VEGF治療， PBS組和LPS組給予等容量PBS。在預(yù)定的時間點左心室穿刺，行血氣分析；保留血漿檢測VEGF水平；BALF檢測VEGF水平和蛋白定量；留取肺組織行

7、病理學(xué)檢測、免疫組化檢測以及實時定量PCR檢測VEGF mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：PBS組和sFlt組均無肺損傷改變，與LPS各亞組相比，LPS+sFlt各亞組的血氣和病理指標(biāo)均有所改善，與LPS 24h組相比，LPS+sFlt 24h組的低氧血癥（64.24±10.53 mmHgvs84.31±7.23 mmHg, P＜0.001）和酸中毒（7.17±0.05vs7.29±0.07, P＜0.05）明顯減輕，且無二氧化碳潴留（49.00

8、±9.19 mmHgvs36.51±4.83 mmHg, P＜0.05）；肺損傷評分（12vs6, P＜0.05）和BALF蛋白定量（569.17±114.68 μg/mlvs264.82±76.92 μg/ml, P＜0.05）均明顯降低；與LPS組相比，LPS+sFlt組血漿（31.53±1.96 pg/mlvs39.69±8.98 pg/ml, P＞0.05）、BALF（160.14±34.25 pg/mlvs127.52±17.

9、83 pg/ml, P＞0.05）和肺組織中的VEGF及VEGF mRNA（0.55±0.10vs0.66±0.10, P＞0.05）的表達(dá)均無明顯變化。結(jié)論：sFlt-1能夠有效地改善ALI的癥狀，其作用機制可能是通過競爭性抑制VEGFR-1與VEGF的結(jié)合，從而抑制VEGF的作用，維持了呼吸膜的形態(tài)和功能，改善ALI模型的血氣分析和病理評分，減少血漿蛋白的滲漏。
　　 第三部分 抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子對肺損傷保護(hù)機制的研究

10、
　　 目的：探討VEGF在LPS吸入導(dǎo)致的ALI模型中的作用機制及sFlt對ALI的保護(hù)機制。方法：將60只雄性BALB/c小鼠隨機分為4組，分別為PBS組、sFlt組、LPS組和LPS+sFlt組，再按時間點將每組動物分為3個亞組（4h組、24h組、48h組），所有動物麻醉后插入氣管導(dǎo)管，LPS組和LPS+sFlt組吸入LPS（3mg/kg），PBS組和sFlt組吸入等量PBS，sFlt組和LPS+sFlt組從尾靜脈給予50

11、μg/kg的sFlt-1，PBS組和LPS組給予等量PBS。在預(yù)定的時間點放血處死動物，留取肺組織進(jìn)行超微病理學(xué)檢測并計算凋亡指數(shù)，實時定量PCR檢測凋亡蛋白Bcl2、BAX mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：LPS各組肺泡上皮細(xì)胞緊密連接松解，肺泡上皮通透性增加，呼吸膜腫脹增厚，sFlt-1明顯改善ALI肺組織中肺泡上皮細(xì)胞的緊密連接松解，減少BALF蛋白滲漏，降低呼吸膜厚度，但對肺泡上皮細(xì)胞的凋亡指數(shù)和凋亡蛋白Bcl2、BAX mRNA的表

12、達(dá)水平?jīng)]有明顯影響。結(jié)論：在LPS導(dǎo)致的ALI模型中，VEGF使肺泡上皮細(xì)胞緊密連接松解、呼吸膜通透性升高、血漿蛋白滲漏增加、呼吸膜充血、水腫、增厚，導(dǎo)致氣體交換障礙。sFlt-1能阻斷VEGF的作用，有效維護(hù)呼吸膜的正常形態(tài)和功能，改善ALI的癥狀。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實驗采用氣管內(nèi)滴入LPS，成功建立了ALI動物模型。
　　 2.在LPS吸入導(dǎo)致的ALI模型中，血漿、BALF和肺組織中的VEGF升

13、高，BALF中VEGF與蛋白定量呈正比，提示VEGF升高參與了LPS所致ALI的病理生理過程。
　　 3.采用sFlt-1進(jìn)行抗VEGF治療能有效改善ALI導(dǎo)致的低氧、二氧化碳潴留和酸中毒，降低BALF蛋白含量和肺損傷評分。
　　 4.VEGF升高使肺泡上皮細(xì)胞緊密連接松解，呼吸膜通透性增加，導(dǎo)致了血漿蛋白滲漏，呼吸膜增厚和氣體交換障礙。
　　 5.sFlt-1治療ALI的機理在于減輕了VEGF導(dǎo)致的肺泡上