血管內皮生長因子在急性肺損傷中動態(tài)變化以及激素干預效果的研究.pdf

1、目的:探討血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在急性肺損傷中(Acute lung injury,ALI)的動態(tài)變化和地塞米松的干預效果,為臨床合理應用糖皮質激素治療不同誘因引起的ALI/ARDS提供理論依據。
　　 方法:將112只清潔雄性SD大鼠按隨機數字表法分為14組,尾靜脈注射生理鹽水1ml對照組、尾靜脈注射脂多糖(LPS8mg/kg)2h、4h、6h模型組、

2、氣管內滴入大腸桿菌標準菌株懸液(E.coli3ml/kg)12h、24h、36h模型組,NS+Dex組及LPS2h+Dex組、4h+Dex組、6h+Dex組、E.coli12h+Dex組、24h+Dex組、36h+Dex干預組,每組8只。干預組在造模結束后立即腹腔內注射地塞米松2mg/kg。造模結束后于各時間點10％水合氯醛腹腔注射麻醉(3ml/kg),固定在手術臺上。股動脈放血,收集血液,離心(3000 rpm,4℃,10min),吸

3、取上清,分裝,-80℃保存,用于進行VEGF測定,開胸處死動物,暴露肺組織,止血鉗夾閉右主支氣管后,將右肺完整切除,取右肺上葉肺組織用于濕/干重比檢測,取右肺中葉肺組織用10％中性福爾馬林溶液固定,留做病理及免疫組織化學檢查。分離出氣管,經氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗,取支氣管肺泡灌洗液(BALF),離心(1200 rpm,4℃,10min)，上清液分裝,-80℃保存,用于蛋白含量及VEGF的測定。細胞沉淀懸浮于200微升生理鹽水中,進

4、行白細胞計數,同時觀察地塞米松對上述指標的影響。
　　 結果:(1)肺組織病理形態(tài)學:光鏡下觀察脂多糖2小時后開始出現(xiàn)肺血管充血,炎癥細胞的浸潤,肺間質水腫,4小時出現(xiàn)典型ALI的表現(xiàn):透明膜形成,6小時與4小時病理半定量評分比較無統(tǒng)計學差異;在氣管內滴入大腸桿菌12小時后,發(fā)現(xiàn)大量炎癥細胞浸潤、氣道上皮細胞的脫落,肺泡水腫,24小時出現(xiàn)肺泡上皮細胞空泡化,壞死,細胞增殖,大量纖維蛋白的滲出,透明膜形成,部分肺實變。36小時較2

5、4小時病理半定量評分無統(tǒng)計學差異。給予激素干預后,LPS模型在2小時、4小時、6小時可見浸潤的炎癥細胞減少,蛋白滲出較少,病理半定量評分也相應減少;E.coli模型在24小時、36小時出現(xiàn)肺泡水腫減輕,炎癥細胞浸潤及透明膜減少,病理半定量評分也相應減少。
　　 (2)BALF中細胞總數、蛋白含量和肺組織W/D的變化:在LPS模型中BALF中細胞計數隨著時間的延長,肺泡灌洗液中細胞計數明顯增多,給予激素后肺泡灌洗液中細胞計數明顯下

6、降;肺泡灌洗液中蛋白4小時達高峰,6小時開始下降,激素干預組同比相應下降;濕干比,在LPS組2小時較對照組明顯升高,但隨著時間的推移,未出現(xiàn)統(tǒng)計學意義的進一步增加,激素干預組同比相應下降;在E.coli模型中肺泡灌洗液中細胞計數,肺泡灌洗液中蛋白,濕干比,隨著時間的延長,未出現(xiàn)統(tǒng)計學意義的增加,12小時、24小時與36小時比較無統(tǒng)計學意義,給予激素后24小時、36小時均明顯下降。
　　 (3)血清和BALF中VEGF含量的變化:

7、血清中VEGF在LPS模型中2小時明顯高于對照組,6小時達高峰;在E.coli模型中12小時明顯高于對照組,隨著時間延長而增多,但無統(tǒng)計學意義,激素干預在兩模型組血清VEGF未呈現(xiàn)顯著差異,BALF中VEGF在LPS模型中2小時明顯高于對照組,隨著時間延長逐漸增加;在E.coli模型中12小時明顯高于對照組,隨著時間延長,逐漸增多;激素干預后兩模型BALF中VEGF均下降。
　　 (4)VEGF在肺組織表達的變化:VEGF陽性細

8、胞百分比在LPS模型中2小時明顯低于對照組,4小時出現(xiàn)升高,并高于對照組,6小時明顯高于4小時,激素干預組各時間點均下降;在E.coli模型12小時明顯高于對照組,隨著時間延長表達增多,給予激素后下降;陽性目標積分光密度值在LPS模型中2小時明顯低于對照組,隨著時間延長增多,但6小時才達對照水平,給予激素后明顯下降,在E.coli模型12小時明顯高于對照組,隨著時間延長表達增多,給予激素后下降。
　　 (5)直線相關分析顯示:E

9、.coli組VEGF陽性率與肺泡灌洗液中細胞計數、陽性目標積分光密度值呈顯著正相關與血清中VEGF呈負相關;LPS組BALF中VEGF與肺泡灌洗液中細胞計數、病理評分、BALF中VEGF陽性率、陽性目標積分光密度值呈顯著正相關與血清中VEGF呈負相關。
　　 結論:
　　 1成功的復制了氣道內注入大腸桿菌混懸液導致的內源性急性肺損傷模型和尾靜脈注射LPS導致的外源性急性肺損傷模型。
　　 2 LPS誘導急性肺損傷