山東部分地區(qū)肉雞屠宰加工生產(chǎn)鏈沙門(mén)氏菌污染狀況調(diào)查和耐藥性分析.pdf

1、通過(guò)對(duì)山東地區(qū)肉雞屠宰加工生產(chǎn)鏈各環(huán)節(jié)中的沙門(mén)氏菌進(jìn)行調(diào)查，了解山東省不同地區(qū)屠宰生產(chǎn)鏈中各環(huán)節(jié)沙門(mén)氏菌的污染水平、血清型分布，耐藥性情況以及毒力基因的攜帶情況。結(jié)合ERIC-PCR分型方法對(duì)生產(chǎn)鏈中的沙門(mén)氏菌進(jìn)行分子研究，比較不同地區(qū)菌株間的親緣關(guān)系，為菌株的流行病學(xué)研究提供技術(shù)基礎(chǔ)。
　　本研究采集山東省6個(gè)地區(qū)7個(gè)大中型屠宰場(chǎng)不同屠宰環(huán)節(jié)中的995份樣品，利用常規(guī)檢測(cè)方法和PCR對(duì)菌株進(jìn)行分離鑒定，xMAP液相芯片法鑒定血清

2、型。在995份樣品中共分離出233株沙門(mén)氏菌，總分離率為23.41％，不同地區(qū)沙門(mén)氏菌的分離率不同，其中A地區(qū)的分離率最低為14.98%，B地區(qū)的分離率最高為67.50%；在肉雞不同屠宰環(huán)節(jié)中沙門(mén)氏菌的的分離率不同，其中燙洗機(jī)和褪毛機(jī)中沙門(mén)氏菌分離率最高，達(dá)48%，預(yù)冷后的胴體表面的分離率最低，為7.69%；共得到25種不同的血清型，其中有四種為優(yōu)勢(shì)血清型，分別是：腸炎沙門(mén)氏菌，印第安納沙門(mén)氏菌，湯普遜沙門(mén)氏菌，德?tīng)柋吧抽T(mén)氏菌。

3、　　利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增整合酶基因 int l檢測(cè)沙門(mén)氏茵中 I類(lèi)整合子攜帶率及可變區(qū)耐藥基因盒,并對(duì)從β-內(nèi)酰胺類(lèi)、磺胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)和酰胺醇類(lèi)5類(lèi)抗生素的15種耐藥基因進(jìn)行檢測(cè)，微量肉湯稀釋法（MIC法）測(cè)定菌株對(duì)8類(lèi)13種抗菌藥的敏感程度。233株沙門(mén)氏菌對(duì)13種藥物耐藥程度明顯不同，其中對(duì)GM耐藥程度最高，為100%，其次為DOX，耐藥率為84.94%；2株菌表現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)中所有抗生素的全抗性，未出現(xiàn)全敏感性菌

4、株。223株(95％)至少可耐2種抗生素，共產(chǎn)生了57種耐藥譜，耐藥譜型復(fù)雜，主導(dǎo)耐藥菌譜是 GM-DOX、GM-SPT-DOX-AM、ENR-TE-GM-SPT-DOX-EFT-FFC-SF-SXT-AM。69%的沙門(mén)氏菌檢測(cè)出第 I類(lèi)整合子。PCR擴(kuò)增I類(lèi)整合子耐藥基因盒，檢測(cè)率為73%，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為1009 bp和1664bp，攜帶 aadA5、dfrl7和aadA2耐藥基因，可分別介導(dǎo)對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素壯觀霉素、鏈霉素和磺胺類(lèi)

5、藥物甲氧芐氨嘧啶的耐藥。
　　檢測(cè)位于菌株毒力島（SPI）和毒力質(zhì)粒（spv）等共15對(duì)毒力基因的攜帶情況。沙門(mén)氏菌的毒力島基因sptP，sseL，mgtC，siiE，sopB的攜帶率是100%，毒力基因spvA、spvB、spvC、spvD、spvR、iacp，avra，prgk、fima和stn的檢出率分別是60%、34%、49%、51%、63%、99%，38%、99%、99%和99%。
　　利用ERIC-PCR對(duì)菌株進(jìn)

6、行分型并利用NTSYS-pc2.1繪制聚類(lèi)分析圖。來(lái)自不同屠宰環(huán)節(jié)的68株沙門(mén)氏菌按80%的同源性可以分為3個(gè)聚類(lèi)簇（I～I(xiàn)II）。選擇山東省不同地區(qū)的主要血清型的沙門(mén)氏菌共26株菌，按90%的同源性可以分為9個(gè)基因型（I～I(xiàn)X）。來(lái)自山東省不同地區(qū)的17株腸炎沙門(mén)氏菌按90%的同源性可以分為7個(gè)基因型（I～VII）。I類(lèi)為主要基因型，共有7株沙門(mén)氏菌，包括6個(gè)地區(qū)的沙門(mén)氏菌。剩余6個(gè)的基因型均為A地區(qū)分離到的沙門(mén)氏菌。
　　山東