雌激素治療骨質(zhì)疏松癥機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下兩個部分展開論述：
　　第一部分 雌激素對大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響
　　目的:探討雌激素在體外對大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響。
　　方法:體外分離培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞(osteoblasts, OB),取傳一代細(xì)胞,予以10-8mol/l雌二醇(estradiol, E2)培養(yǎng)72小時,設(shè)空白對照組。應(yīng)用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色法鑒定成骨細(xì)胞,然后測定ALP活性

2、并檢測成骨細(xì)胞的增殖能力。用茜素紅法對成骨細(xì)胞行礦化結(jié)節(jié)染色,低倍光學(xué)顯微鏡下測量礦化結(jié)節(jié)面積并計算面積比,觀察E2對礦化能力的影響。
　　結(jié)果:和對照組相比E2組OB增殖能力顯著提高(p<0.01),ALP活性顯著升高(p<0.01),礦化面積及礦化面積比顯著增加(p<0.01)。
　　結(jié)論:E2在體外促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞生長和增殖,提高ALP活性,并促進(jìn)骨礦化物質(zhì)在骨內(nèi)沉積。
　　第二部分 17β-雌二醇對骨肉瘤MG6

3、3細(xì)胞株中IL-6、IL-11和NF-κB表達(dá)的影響
　　目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)對人骨肉瘤 MG63細(xì)胞株 IL-6﹑IL-11及NF-κB的表達(dá)的影響。
　　方法:運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)人骨肉瘤 MG63細(xì)胞24小時,然后分別給予10-10mol/L﹑10-8mol/L、10-6mol/L的17β-E2干預(yù)24小時后提取細(xì)胞mRNA和蛋白質(zhì),其中10-8mol/L17β-E2培養(yǎng)組分別在培養(yǎng)0小時、3小時、

4、6小時、12小時、24小時時提取細(xì)胞mRNA和蛋白質(zhì)。運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測IL-6﹑IL-11mRNA,運(yùn)用Western Blot檢測IL-6及NF-κB蛋白質(zhì),觀察不同濃度17β-E2及同一濃度雌激素作用不同時間對人骨肉瘤MG63細(xì)胞株IL-6﹑IL-11及NF-κB的表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)10-10mol/L17β-E2組IL-6mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)下降,但無顯著性差異,隨濃度增加MG63細(xì)胞株IL-6mRNA

5、及蛋白質(zhì)的表達(dá)繼續(xù)下降,并有顯著性意義;(2)17β-E2可下調(diào)MG63細(xì)胞株IL-11mRNA的表達(dá),隨濃度增加,時間延長,表達(dá)下調(diào)越明顯;(3)17β-E2可下調(diào)MG63細(xì)胞株NF-κB蛋白質(zhì)的表達(dá),并較IL-6、IL-11要早,呈濃度和時間依賴性。
　　結(jié)論:雌激素可抑制成骨細(xì)胞NF-κB的合成,下調(diào)成骨細(xì)胞 IL-6﹑IL-11的表達(dá),可能從多個作用部位減弱破骨細(xì)胞的作用,從而抑制骨吸收,以治療骨質(zhì)疏松癥,是婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)