抗病毒治療對HIV-HCV合并感染者線粒體毒性的影響.pdf

1、由于人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）傳播途徑相類似，都可以通過輸血、靜脈吸毒、性傳播、母嬰垂直傳播等途徑傳播，故兩者合并感染率高。據(jù)統(tǒng)計，HIV感染者中約有1/3合并 HCV感染，合并感染已成為全球性的重要公共衛(wèi)生問題。隨著高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（highly active anti-retrovirus therapy，HAA

2、RT）的廣泛普及，HIV/艾滋?。╝cquired immunodeficiency syndrome，AIDS）患者的病死率及生存狀況得到明顯改善，使 AIDS由一種“絕癥”逐漸轉(zhuǎn)化成了一種可控的慢性病。肝臟相關(guān)疾病是非 AIDS相關(guān)疾病導致 HIV患者死亡的首要死因，而合并 HCV感染更加明顯。因此合并感染者需聯(lián)合抗病毒治療，即 HAART加抗 HCV治療，來延緩 HCV相關(guān)的肝病進展和降低抗逆轉(zhuǎn)錄病毒（antiretroviral

3、 drug，ARV）藥物相關(guān)的肝損傷。HIV/AIDS患者須終身 HAART用藥，其長期毒副作用逐漸凸現(xiàn)，以核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（Nucleoside reverse-transcriptase inhibitors NRTIs）引起的線粒體毒性為主。
　　目前關(guān)于 NRTIs對 HIV單一感染者線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響研究已經(jīng)比較深入，而關(guān)于 HIV/HCV合并感染者線粒體毒性的研究較少。對于合并感染者，兩種病毒本身對線粒體均有一

4、定的影響，抗病毒藥物之間存在潛在的相互作用及重疊的毒副作用，使線粒體損傷情況十分復雜。與單純 HCV感染相比，合并感染者治療難度大、持續(xù)病毒學應答率(Sustained VirologicalResponse，SVR)較低，但國外有研究發(fā)現(xiàn)在接受 HAART出現(xiàn)線粒體毒性癥狀的患者后續(xù)采用干擾素加利巴韋林抗 HCV時，快速病毒學應答(Rapid Virological Response，RVR)和SVR明顯高于無線粒體毒性癥狀者，尤其是

5、使用大劑量利巴韋林患者明顯。因此，闡明病毒、藥物等對線粒體毒性的影響，及其對病毒學應答的影響，并探索反映線粒體毒性較敏感的指標，不僅便于指導臨床用藥方案的合理選擇及更換具有重要意義，亦是國家十二五重大科技專項的目的之一。
　　本研究第一部分以我國成人 HIV／HCV合并感染人群和HIV單一感染人群為研究對象，比較 HAART前及治療不同時間點外周血單個核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，P

6、BMC）內(nèi) mtDNA含量、TK2及 p53R2轉(zhuǎn)錄水平并進行分析其差異，探討 HIV、HCV及抗 HIV藥物對合并感染者線粒體毒性發(fā)生的影響；第二部分以不同 CD4水平的2組 HIV／HCV合并感染人群為研究對象，研究抗 HIV抗 HCV聯(lián)合治療（即 HAART(+)PR(+)組）及抗 HCV單獨治療（即HAART(-)PR(+)組）的不同時間點 PBMC內(nèi) mtDNA含量、TK2及 p53R2轉(zhuǎn)錄水平差異，探討抗病毒藥物對合并感染者

7、線粒體毒性發(fā)生的影響；第三部分比較HIV/HCV合并感染者接受 Peg-IFN-α-2а/RBV（PR）治療后不同臨床轉(zhuǎn)歸的mtDNA含量，分析影響療效的臨床相關(guān)因素，探討線粒體損傷程度與抗病毒療效的關(guān)系。
　　研究目的：
　　觀察抗病毒治療對 HIV/HCV合并感染者、HIV感染者外周血相關(guān)線粒體指標的變化，探索較敏感的檢測指標，分析引起線粒體毒性的影響因素；研究HIV/HCV合并感染者線粒體毒性與病毒學應答率的關(guān)系；初步

8、探討 HIV/HCV合并感染者不同免疫水平抗病毒治療發(fā)生線粒體毒性情況。
　　研究方法：
　　選擇廣州市第八人民醫(yī)院國家“十二五”國家科技重大專項課題“HIV合并HCV感染人群抗病毒治療”接受 Peg-IFN-α-2а/RBV治療 HIV/HCV合并感染者14例、接受 HAART+Peg-IFN-α-2а/RBV治療的合并感染者37例、接受 HAART合并感染者33例以及接受 HAART HIV感染者42例為研究對象；應用實

9、時熒光定量 PCR檢測所有患者基線與治療后不同時間點 PBMCs中線粒體 DNA含量、TK2及 P53R2轉(zhuǎn)錄水平；檢測合并感染者接受 Peg-IFN-α-2а/RBV治療或聯(lián)合HAART后的病毒學應答情況、治療前后免疫學及血清學生化指標，評價線粒體損傷對病毒學應答的影響。所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。
　　研究結(jié)果：
　　第一部分
　　1．HIV/HCV合并感染者 HAART后 mtDNA含量（

10、mtDNA/nDNA）降低（治療前、HAART12周、24周、48周、72周及96周分別為39.20、40.37、35.23、35.05、33.75、31.31），HIV單一感染者 HAART后 mtDNA含量變化趨勢為先升高后降低（分別為43.83、41.5、52.33、59.45、51.395、46.36）；HIV/HCV合并感染組 HAART24周、48周、72周及96周外周血中mtDNA含量明顯低于HIV單一感染者（Z=-2.0

11、09、-2.95、-2.812和-3.075，P＜0.05）。
　　2．HIV/HCV合并感染者及 HIV感染者 HAART后 TK2表達量均增加（治療前、HAART12周、24周、48周、72周及96周分別為4.18、4.31、4.41、5.40、5.52、5.36和4.31、5.09、4.77、4.70、5.46、5.21），兩者不同時間點比較均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3．HIV/HCV合并感染者 HAART

12、后 p53R2表達量增加（治療前、HAART12周、24周、48周、72周及96周分別為1.27、1.58、1.46、1.83、1.56、2.28）；HIV單一感染者 HAART后 p53R2表達量變化趨勢為先降低后增加（分別為1.66、1.68、1.53、1.37、1.98、1.88）；與 HIV感染者比較，合并感染者治療48周、96周后表達量明顯升高（Z=-2.113和-2.797，P＜0.05）。
　　第二部分
　　1

13、．HIV/HCV合并感染者 HAART(+)PR(+)組治療后 mtDNA含量增加（HAART前基線、PR前基線、12周、24周、48周及治療結(jié)束后24周分別為40.52、50.06、50.19、55.9、64.93、70.23），HAART(-)PR(+)組治療后 mtDNA含量變化趨勢為先升高后降低（分別為40.245、46.395、44.5、59.81、35.78）；HAART(+)PR(+)組 mtDNA含量在治療各時間點高于

14、HAART(-)PR(+)組，其中24周及 PR治療結(jié)束后24周有顯著性差異（Z=-1.981和-3.369，P＜0.05）。
　　2．HIV/HCV合并感染者HAART(+)PR(+)組及HAART(-)PR(+)組治療后TK2表達量均增加（治療前、12周、24周、48周、治療結(jié)束后24周分別為6.07、5.31、6.36、6.27、6.4和5.76、6.41、6.14、6.88、9.06）；兩組不同時間點比較均無統(tǒng)計學意義（P

15、＞0.05）。
　　3．HIV/HCV合并感染者HAART(+)PR(+)組治療后p53R2表達量無明顯變化（治療前、12周、24周、48周、治療結(jié)束后24周分別為4.16、4.07、4.09、4.15、4.03），HAART(-)PR(+)組治療后 p53R2表達量增加（4.07、4.31、4.29、6.75、9.0）；與 HAART(+)PR(+)組比較，HAART(-)PR(+)組治療結(jié)束后24周 p53R2表達量明顯升高（

16、Z=-1.986，P＜0.05）。
　　第三部分
　　1．HIV/HCV合并感染者 SVR組基線 CD4+T細胞計數(shù)為（279.96±50.09個/ul），高于 non-SVR組（202.56±76.96個/ul，P＜0.01）。
　　2．HIV/HCV合并感染者 SVR組及 non-SVR組抗病毒治療過程中血紅蛋白均有下降（HAART前基線、PR前基線、4周、12周、24周、36周、48周分別為122.411±27.

17、60、128.05±22.27、120±20.73、119±20.60、136.35±24.03、138.95±21.85、128.75±21.17和124.56±16.03、112.78±9.31、99±12.82、104.44±14.04、105.13±21.18、101.44±13.59、98.14±27.51）；non-SVR組血紅蛋白在 PR4周、24周、36周及48周明顯低于 SVR組（P＜0.05）。
　　3．HIV

18、/HCV合并感染者 SVR組及 non-SVR組治療后 mtDNA含量增加（治療前及治療12周、24周、48周、治療結(jié)束后24周分別為46.35、47.47、46.475、65.85、60.66和60.505、63.09、78.76、69.06、71.83）；SVR組 mtDNA含量低于 non-SVR組，但無統(tǒng)計學意義。
　　4．血紅蛋白水平與 mtDNA含量不存在相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1．在目前常用的線粒體毒性

19、檢測指標中，mtDNA含量是檢測 PBMC線粒體毒性的敏感指標；
　　2．HIV/HCV合并感染者 HAART后 mtDNA含量低于 HIV單一感染者，具有顯著性差異。表明 HIV/HCV合并感染者線粒體損傷比單一 HIV感染者重；
　　3．HIV/HCV合并感染者 HAART+PR治療后線粒體損傷反而比未 HAART輕，提示：HIV或 HCV感染本身也會導致線粒體損傷；
　　4．相對高 CD4+T細胞水平（200-3