電擊死大鼠皮膚特殊染色與心臟HIF-2α、h-FABP表達(dá)變化研究.pdf

1、目的:電流通過(guò)人體引起的可感知的物理效應(yīng)稱(chēng)為電擊，因電流作用導(dǎo)致人體死亡，稱(chēng)電擊死(electric death)。在法醫(yī)實(shí)踐中由電流引起的損傷或死亡比較多見(jiàn)，且多為意外或?yàn)?zāi)害事故，也可見(jiàn)于自殺和他殺。電流斑(electric mark)是判斷電擊死的主要形態(tài)學(xué)依據(jù)，然而在低電壓、環(huán)境潮濕、水中觸電等情況下則有可能不形成電流斑，此類(lèi)案件一般是結(jié)合案情、現(xiàn)場(chǎng)和尸體檢驗(yàn)等方面綜合作出判斷，法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)尚缺乏形態(tài)學(xué)依據(jù)，因此電擊死尤其是無(wú)明顯電

2、流斑電擊死的判定以及生前與死后電擊的鑒別診斷仍然是法醫(yī)病理學(xué)亟待解決的問(wèn)題。
　　本實(shí)驗(yàn)建立在大鼠電擊死模型的基礎(chǔ)上，利用HE染色、EVG染色、Alcian blue-核固紅染色、掃描電鏡以及X線能譜檢測(cè)法觀察大鼠電擊部位皮膚的特異性改變;同時(shí)對(duì)心臟缺氧誘導(dǎo)因子2α(HIF-2α)、心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)，以期為電擊死的法醫(yī)學(xué)判定提供依據(jù)。
　　方法:
　　1大鼠皮膚HE染色、皮膚EVG染

3、色、皮膚Alcian blue-核固紅染色和心肌免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)分組:健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只，雌雄不限，體重220±10g，適應(yīng)環(huán)境喂養(yǎng)1周，按完全隨機(jī)分組方法隨機(jī)分為電擊死組、死后電擊組、正常對(duì)照組，每組24只。電擊死組大鼠經(jīng)水合氯醛腹腔注射麻醉后連接自制電擊裝置，金屬夾連接大鼠左前肢與右后肢，接通電源(220V,50Hz)電擊至死，各亞組（每組8只）分別于死后即刻、死后30min、死后1h取電擊部位皮

4、膚和心臟;死后電擊組大鼠水合氯醛麻醉后頸椎脫臼法處死，各亞組（每組8只）分別于死后即刻、死后30min、死后1h連接電擊裝置通電2min，電擊后立即取電擊部位皮膚和心臟;對(duì)照組大鼠麻醉后頸椎脫臼法處死，連接自制電擊裝置2min，不通電，各亞組（每組8只）分別于死后即刻、死后30min、死后1h取電擊部位皮膚和心臟。組織取出后，立即放入4％多聚甲醛固定液中。
　　2皮膚掃描電鏡與X射線能譜分析實(shí)驗(yàn)分組:健康Sprague-Dawle

5、y(SD)大鼠60只，雌雄不限，體重220±10g，適應(yīng)環(huán)境喂養(yǎng)1周，按完全隨機(jī)分組方法隨機(jī)分為電擊死組、死后電擊組、正常對(duì)照組，每組20只。電擊死組大鼠經(jīng)水合氯醛注射麻醉后連接自制電擊裝置，金屬夾連接大鼠左前肢與右后肢，接通電源(220V,50Hz)電擊至死，按連接金屬片的不同分為銅、鐵、鋁、鉛四個(gè)亞組，每組5只，死后立即取電擊部位皮膚;死后電擊組大鼠水合氯醛麻醉后頸椎脫臼法處死，于死后連接電擊裝置通電2min，按連接金屬片的不同分為

6、銅、鐵、鋁、鉛四個(gè)亞組，電擊后立即取電擊部位皮膚;對(duì)照組大鼠麻醉后頸椎脫臼法處死，連接自制電擊裝置2min，按連接金屬片的不同分為銅、鐵、鋁、鉛四個(gè)亞組，不通電，取電擊部位皮膚。
　　數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)”表示，用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA)，用最小顯著差法(least significant difference，LSD)作兩兩比較，以P＜0.05為有顯著

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1大鼠皮膚染色
　　1.1大鼠皮膚HE染色
　　正常對(duì)照組HE染色可見(jiàn)表皮細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞核無(wú)極性化改變;電擊死組與死后電擊組大鼠皮膚光鏡下可見(jiàn)表皮細(xì)胞融合變薄，部分缺損，有燒焦表現(xiàn)，細(xì)胞胞漿著色較深，部分表皮細(xì)胞嗜酸性改變，基底層細(xì)胞和核縱向拉長(zhǎng)，表皮細(xì)胞層及其下層大量空泡形成，真皮層有凝固性壞死。
　　1.2大鼠皮膚EVG染色
　　EVG染色可將細(xì)胞核和彈性纖維染成

8、黑色，膠原纖維染成紅色。對(duì)照組大鼠皮膚彈力纖維整齊，細(xì)胞核清晰。電擊組大鼠表皮部分缺損，細(xì)胞核可見(jiàn)極性化改變，彈力纖維可見(jiàn)扭曲，部分?jǐn)嗔?，因收縮而變得較為粗短，膠原纖維層均質(zhì)化，染色能力減弱，皮下可見(jiàn)出血。死后電擊組大鼠表皮可見(jiàn)極性化改變，彈力纖維扭曲，部分?jǐn)嗔?，因收縮而變得較為粗短，網(wǎng)織層均質(zhì)化。
　　1.3大鼠皮膚Alcian blue-核固紅染色
　　Alcian blue-核固紅染色可將細(xì)胞核染成紅色，酸性黏蛋白、蛋

9、白多糖和透明質(zhì)酸染成藍(lán)色。對(duì)照組大鼠皮膚網(wǎng)織層纖維藍(lán)染，細(xì)胞核紅染。電擊死組與死后電擊組大鼠皮膚可見(jiàn)棘細(xì)胞層及基底層細(xì)胞核極性化改變;網(wǎng)織層均質(zhì)化，藍(lán)色未能著色，呈現(xiàn)較均勻一致的粉色;部分細(xì)胞核藍(lán)染。
　　2皮膚掃描電鏡X射線能譜分析
　　2.1皮膚掃描電鏡
　　正常對(duì)照組皮膚電鏡下觀察可見(jiàn)復(fù)層扁平上皮排列整齊，細(xì)胞界限清晰。電擊死組鏡下可見(jiàn)大量細(xì)胞碎屑，細(xì)胞界限不清，細(xì)胞表面可見(jiàn)枯焦?fàn)铨斄眩⒃趫A形和橢圓形小孔，邊緣

10、不規(guī)則，散在存在大量球形異物顆粒;死后電擊組改變與電擊死組相一致。
　　2.2皮膚X射線能譜分析
　　對(duì)照組皮膚經(jīng)X射線能譜分析未檢測(cè)出銅、鐵、鋁、鉛等金屬元素，電擊死各亞組均檢出與接觸電極片相一致的金屬元素，死后電擊組各亞組也均檢出與接觸電極片相一致的金屬元素，且元素含量與電擊死組存在一定差異。
　　3心臟免疫組化染色結(jié)果
　　3.1心臟HIF-2α免疫組化染色結(jié)果
　　HIF-2α蛋白在心肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)為

11、細(xì)胞核著色。對(duì)照組大鼠心臟偶見(jiàn)少量陽(yáng)性表達(dá)，且各亞組無(wú)明顯差異;電擊死即刻組心肌細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，電擊死30min組陽(yáng)性表達(dá)與即刻組比較無(wú)明顯差異，電擊死60min組陽(yáng)性表達(dá)減弱，但仍高于正常60min組;死后即刻電擊組心肌細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)較正常對(duì)照組增加，低于電擊死即刻組，死后30min電擊組、死后60min電擊組陽(yáng)性表達(dá)與正常30min、60min對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。3.2心臟H-FABP免疫組化染色結(jié)果
　　H-FABP蛋

12、白在心肌細(xì)胞的表達(dá)為細(xì)胞胞漿著色。正常對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)，可見(jiàn)少量點(diǎn)狀缺染;電擊死組大鼠心肌細(xì)胞可見(jiàn)缺染，且缺染面積隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增大，即缺染面積:電擊死即刻組＜電擊死30min組＜電擊死60min組;死后即刻電擊組大鼠心肌細(xì)胞可見(jiàn)缺染，缺染面積高于對(duì)照組，小于電擊死即刻組，死后30min電擊組、死后60min電擊組組與死后即刻電擊組比較無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1電擊后大鼠皮膚EVG染色和Alcian blue