創(chuàng)傷性腦損傷合并四肢骨折后大鼠血清對成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的影響.pdf

1、研究目的：通過建立Sprague-Dawley大鼠股骨骨折合并創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)的動物模型，觀察傷后大鼠血清對成骨細(xì)胞、成熟破骨細(xì)胞及破骨前體細(xì)胞Raw264.7的影響，探索四肢骨折合并顱腦損傷后，機(jī)體及體液因素成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的作用。
　　 研究方法：取250-300g SD大鼠40只，平均分入股骨骨折合并腦損傷組（A組）、單純股骨骨折組（B組）、單純腦損傷組（C組）和完全對照組（D組）。建立股骨骨折及創(chuàng)傷性腦損傷模型，

2、于傷后24小時取每組全部10只大鼠血液并提取血清，混合后按10％加入細(xì)胞培養(yǎng)液，觀察其對大鼠的成熟破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及其與RAW264.7細(xì)胞共培養(yǎng)體系的作用。計數(shù)加入血清3天后成熟破骨細(xì)胞TRAP染色陽性數(shù)目；定量測定7天后成骨細(xì)胞堿性磷酸含量。對于共培養(yǎng)體系，將RAW264.7細(xì)胞與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)10天后生成的破骨樣多核巨細(xì)胞進(jìn)行TRAP染色鑒定并計數(shù)，采用RT-PCR半定量測定破骨細(xì)胞標(biāo)志酶MMP-9和TRAP的表達(dá)。
　　

3、 實驗結(jié)果：加入血清后，各組成熟破骨細(xì)胞TRAP染色陽性數(shù)目無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。A組和B組成骨細(xì)胞增殖速度較C組和D組加快，提前進(jìn)入對數(shù)生長期及平臺期，堿性磷酸酶定量結(jié)果較C組和D組升高。同時，經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的TRAP染色陽性細(xì)胞相對C組和D組減少，破骨細(xì)胞標(biāo)志酶基因MMP-9和TRAP表達(dá)量減低。
　　 實驗結(jié)論：創(chuàng)傷性腦損傷后，體液因素中的血清對已成熟的破骨細(xì)胞未表現(xiàn)出顯著作用，但可使破骨前體細(xì)胞的分化成熟受到抑制，同時促進(jìn)成骨