蘿卜自交不親和性測定與相關(guān)基因的鑒定.pdf

1、蘿卜雜種優(yōu)勢明顯，自交不親和是蘿卜雜交優(yōu)勢利用的一種重要途徑。本研究結(jié)合親和指數(shù)法與熒光顯微觀察法對高代自交材料進行自交不親和測定。利用SLG和SRK的特異引物，通過限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)研究蘿卜的SLG和SRK基因，并對材料的SLG和SRK基因進行克隆驗證。為蘿卜自交不親和性雜優(yōu)利用、了解SLG和SRK基因在十字花科中的進化、蘿卜自交不親和性機理的研究奠定基礎(chǔ)。 1、以蘿卜高代自交系為試材，利用熒光顯微鏡

2、觀察其花期和蕾期自花授粉不同時期柱頭與花柱，結(jié)果發(fā)現(xiàn)自交不親和與自交親和材料花粉萌發(fā)和花粉管伸長狀況存在明顯差異。自交不親和材料花期授粉后柱頭上出現(xiàn)嚴重的胼胝質(zhì)反應(yīng)，花粉很少萌發(fā)，即使萌發(fā)也不能正常生長，出現(xiàn)彎曲或背向生長，花粉管頂端膨大不能穿越柱頭乳突細胞；自交親和系蘿卜單株花期、蕾期以及自交不親和系單株蕾期授粉后花粉多數(shù)能夠正常萌發(fā)并穿越柱頭進入子房。對供試材料進行了田間自交親和指數(shù)測定，與熒光顯微鏡測定法鑒定結(jié)果高度一致。因此利用

3、熒光顯微鏡觀察法可以準確快速鑒定蘿卜的自交不親和性，從而提高優(yōu)良自交不親和系選育效率。 2、蘿卜S位點糖蛋白基因(SLG)和S位點受體激酶(SRK)基因參與了花粉和柱頭之間的自交不親和反應(yīng)。設(shè)計SLG和SRK特異引物，利用：PCR-RFLP技術(shù)對SLG和SRK基因的多態(tài)性進行分析。根據(jù)class Ⅰ SLG特異引物擴增產(chǎn)物限制性內(nèi)切酶酶切后DNA多態(tài)性，19個自交系被分為12個S單元型；SRK特異引物擴增酶切后，20個自交系也分

4、為13個S單元型。classⅡSLG特異引物擴增產(chǎn)物限制性內(nèi)切酶酶切后，根據(jù)DNA多態(tài)性17個自交系被分為6個S單元型。因此PCR-RFLP技術(shù)在區(qū)分蘿卜S單元型中有著重要作用。對5個SLG等位基因和6個SRK等位基因的DNA序列進行了驗證，研究發(fā)現(xiàn)氨基酸序列與甘藍SLG6基因的相似性達80.72％～84.26％，SRK基因與甘藍中SRK3基因也具有很高的相似性。分析蘿卜和甘藍的SLG序列發(fā)現(xiàn)，蘿卜的SLG基因并不自己獨立成一組，而是分