高蛋氨酸飲食誘導(dǎo)血管內(nèi)皮損傷大鼠模型的建立、評價(jià)及機(jī)制研究.pdf

1、目的:高同型半胱氨酸血癥與血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂和器質(zhì)性損傷緊密相關(guān)，是心腦血管疾病發(fā)生的獨(dú)立的誘發(fā)因素。增加蛋氨酸攝入量可以誘發(fā)高半胱氨酸血癥，但尚缺乏系統(tǒng)的體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)論證依據(jù)。本研究旨在探討高蛋氨酸飲食誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型建立的條件、特征、可復(fù)制性及其可能機(jī)理。
　　方法:通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)研究不同比例添加蛋氨酸飲食和不同周期飼養(yǎng)對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型建立的影響及其可能機(jī)制。
　　1、建模條件的確立和模型特征評價(jià):

2、雄性SD大鼠(n=40)，180-220g，隨機(jī)分為正常飲食對照組(對照組，n=10)、1％高蛋氨酸飲食組(1％組，n=10)、3％高蛋氨酸飲食組(3％組，n=10)和5％高蛋氨酸飲食組(5％組，n=10)。對照組喂飼普通基礎(chǔ)飼料，高蛋氨酸飲食組大鼠分別喂飼含1％、3％和5％蛋氨酸的飼料，持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)開始（0周）、第2周、4周、6周和8周末行尾靜脈取血，采用Elisa法檢測血清同型半胱氨酸(Hcy)、一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)含

3、量評價(jià)血管內(nèi)皮功能障礙，采用掃描電鏡觀察主動(dòng)脈弓血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài);
　　2、模型可復(fù)制性研究:另取雄性SD大鼠(n=48)隨機(jī)分為正常飲食對照組(n=12)、1％組(n=12)、3％組(n=12)和5％組(n=12)，持續(xù)8周。每組隨機(jī)選取6只大鼠，收集血液和主動(dòng)脈組織樣本。其余各高蛋氨酸組大鼠全部置換成正常飲食，持續(xù)2周后（10周末），收集全部剩余大鼠的血液和主動(dòng)脈樣本。取8周和10周的血清和組織樣本重復(fù)上述方法1中指標(biāo)檢測;<

4、br>　　3、成模機(jī)理研究:取上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)8周末血清和主動(dòng)脈組織樣本，Elisa法檢測血清白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和主動(dòng)脈誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)含量;Western blot法檢測主動(dòng)脈NF-κB、磷酸化IκB-α、巨噬細(xì)胞趨化因子(MCP)和環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)蛋白表達(dá);用血清樣品液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)代謝組學(xué)方法分析血管內(nèi)皮損傷模型大鼠與正常大鼠間的差異性物質(zhì)分析。
　　結(jié)果

5、:
　　1、不同比例添加蛋氨酸飲食與不同飼養(yǎng)周期對大鼠血清Hcy水平具有顯著地交互作用（P時(shí)間×組別＜0.05）。與對照組相比，1％組大鼠血清Hcy含量在飼養(yǎng)第8周顯著升高(P=0.026)，而3％和5％組大鼠血清Hcy含量分別在在飼養(yǎng)第4周和第6周顯著升高，差異具有極顯著性(P＜0.01);與正常飲食對照組相比，3％和5％組大鼠血清NO、NOS含量顯著下降而ET含量顯著升高，且NO/ET比值顯著降低，差異均具有顯著性（P組間＜0

6、.05）;掃描電鏡顯示1％組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞排列紊亂、胞間隙明顯增寬、偶見有細(xì)胞碎片和血細(xì)胞附著;3％組呈典型“蟲蝕”樣變，病灶邊緣呈鋸齒狀，散在血細(xì)胞和細(xì)胞碎片;5％組血管內(nèi)皮大片崩解或脫落，膠原裸露，伴有大量血細(xì)胞附壁、血栓形成和脂質(zhì)沉積。
　　2、8周高蛋氨酸飼料和10周混合飼料（8周高蛋氨酸+2周正常飼料）均可以明顯提高大鼠血清Hcy和ET而降低NO水平，且與對照組相比差異均具有顯著性（P組間＜0.05）;10周混合飼料各

7、組與相應(yīng)8周高蛋氨酸飲食組相比，上述指標(biāo)均無明顯改變，且差異均無顯著性。
　　3、與正常飲食對照組相比，8周末3％和5％組血清IL-6和TNF-α含量顯著升高，且差異具有顯著性(P＜0.05)，僅5％組大鼠主動(dòng)脈iNOS含量顯著低于對照組;Western blot結(jié)果顯示，8周末3％和5％組大鼠主動(dòng)脈NF-κB表達(dá)顯著高于對照組，而IκB-α和cGMP蛋白表達(dá)明顯低于對照組。
　　結(jié)論:低比例蛋氨酸飼料長期喂養(yǎng)和高比例蛋氨酸