棕櫚酸誘導血管內皮損傷及非諾貝特(酸)干預機制的初步研究.pdf

1、目的:
　　1.觀察高熱量高膽固醇飲食(HCD)能否誘導C57BL/6小鼠產生內皮功能障礙及其病理學變化,以及非諾貝特(FF)是否具有相應的保護作用。
　　2.研究棕櫚酸(PA)是否誘導小鼠胸主動脈內皮細胞(MAEC)產生內質網應激(ERS)及細胞凋亡,以及非諾貝特酸(FA)對棕櫚酸誘導的ERS及細胞凋亡是否具有保護作用。
　　方法:
　　1.體內實驗部分:將小鼠隨機分為正常飲食組(SCD)、HCD組和HCD+非

2、諾貝特治療組,以3個月HCD飲食建立C57BL/6小鼠代謝綜合癥模型,非諾貝特灌胃治療2周。用葡萄糖耐量試驗(GTT)和胰島素耐量試驗(ITT)檢測各組胰島素敏感性。測定血清生化指標TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA,炎性指標TNF-α、MCP-1和IL-6,以及內皮功能障礙指標NO、ET-1的水平。電鏡觀察小鼠胸主動脈內皮細胞超微結構病理學變化。TUNEL法檢測小鼠胸主動脈內皮細胞的原位凋亡。
　　2.體外實驗部分:將體

3、外培養(yǎng)的MAEC分為正常對照組(NC),棕櫚酸組(PA),棕櫚酸+非諾貝特酸干預組(PA+FA高、中、低三個劑量組)。四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測各組細胞增殖率,流式細胞術(FCM)檢測胞內活性氧(ROS)水平和細胞凋亡率(AnnexinV-FITC/PI雙染法),免疫熒光法檢測CHOP的蛋白表達和細胞內定位,Western blot法檢測GRP78的蛋白表達。
　　結果:
　　1.體內實驗部分:三個月HCD飲食后,H

4、CD組小鼠體重明顯高于正常組。ITT和GTT試驗結果表明HCD組小鼠胰島素敏感性下降,非諾貝特治療組胰島素敏感性改善。電鏡觀察顯示HCD組小鼠胸主動脈血管內皮細胞中線粒體有明顯腫脹,內質網呈泡狀結構等病理改變,非諾貝特治療組較HCD組上述細胞器的變化明顯改善。TUNEL結果顯示HCD可誘導細胞出現明顯的凋亡,非諾貝特可明顯減少其凋亡。
　　2.體外實驗部分:與NC組相比,PA對MAEC增殖有明顯的抑制作用,以0.5mmol/LPA

5、作用24h最明顯,FA中濃度組(50μmol/L)即對MAEC的增殖抑制有明顯的改善作用。PA使MAEC細胞內ROS水平明顯升高,FA干預則能顯著降低活性氧水平。與NC組相比,0.5mmol/LPA使MAEC凋亡率明顯增加;中、高濃度FA組凋亡率明顯下降。與NC組相比,PA組CHOP的蛋白表達顯著增加,且主要分布在胞核,FA中、高濃度組CHOP表達明顯減少。PA可顯著誘導GRP78的蛋白表達,中、高濃度FA則明顯減少GRP78的蛋白表達