維生素D對小鼠嚴(yán)重燙傷后炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察維生素D對小鼠嚴(yán)重燙傷后炎癥反應(yīng)的影響，為臨床應(yīng)用維生素D減輕燒傷后炎癥反應(yīng)提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.建立小鼠維生素D缺乏模型
　　 3周齡健康清潔級KM小鼠40只，雌雄各20只，置于避免紫外線的黃光環(huán)境下，雌雄分籠飼養(yǎng)，給予缺乏維生素D飼料(含鈣2％、磷1.25％)。8周后尾靜脈取血，酶聯(lián)免疫法檢測血清25(OH)D3。選取血清25(OH)D3測得值<2.5ng/ml的小鼠形

2、成繁殖對12對，雌雄各1只合籠飼養(yǎng)。待產(chǎn)下小鼠后用第2代小鼠制作燙傷模型，未滿6周齡前置于同樣的黃光無紫外線環(huán)境中，3周齡斷乳，給予缺乏維生素D飼料飼養(yǎng)，滿6周齡時(shí)制作深Ⅱ度燙傷模型。
　　 2.建立維生素D缺乏小鼠燙傷模型
　　 取2代6周齡KM小鼠80只，給每只小鼠腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛(40mg/kg)麻醉，麻醉后背部用4％硫化鈉脫毛。第2天在清醒狀態(tài)下，將背部脫毛區(qū)置于98℃水中13秒，造成背部20％TBSA(

3、2.5cm×2.5cm)深Ⅱ度燙傷(經(jīng)病理切片證實(shí))。燙傷后立即經(jīng)腹腔注射補(bǔ)充乳酸林格氏液0.6ml抗休克。創(chuàng)面涂20％磺胺嘧啶銀霜抗感染2次/天。單籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食。
　　 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組
　　 取燙傷小鼠80只，隨機(jī)分為治療組40只和對照組40只。另取同一飼養(yǎng)機(jī)構(gòu)6周齡KM小鼠16只作為空白組。治療組小鼠燙傷后即刻腹腔注射維生素D2200IU/Kg體重，并且每24小時(shí)注射同樣劑量1次。對照組小鼠燙傷后不予注射維生

4、素D，空白組小鼠不燙傷。
　　 4.觀察指標(biāo)
　　 1)血清炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-4和lL-10
　　 治療組和對照組小鼠于燙傷后6h、12h、24h、48h和96h5個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)各取8只，斷頭處死后取血，酶聯(lián)免疫法檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-4和IL-10濃度。隨機(jī)選取8只空白組小鼠，于斷頭取血后檢測血中上述炎性因子含量。
　　 2)內(nèi)臟組織淋巴結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)和小腸粘膜組織病理觀

5、察
　　 治療組和對照組小鼠傷后48h斷頭取血后，無菌分離肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)制成勻漿，稀釋后接種于LB瓊脂培養(yǎng)基，置37℃的CO2孵箱做需氧細(xì)菌培養(yǎng)；48 h后計(jì)數(shù)菌落數(shù)，計(jì)算每克組織內(nèi)細(xì)菌菌落形成單位(CEU)及其標(biāo)準(zhǔn)差；并取小鼠空腸制作常規(guī)石蠟切片，經(jīng)過HE染色，在光學(xué)顯微鏡下比較兩組小鼠腸粘膜組織的病理變化。剩余8只空白組小鼠同樣制備內(nèi)臟淋巴結(jié)勻漿培養(yǎng)細(xì)菌并制作空腸石蠟切片。
　　 5.統(tǒng)計(jì)方法
　　 采

6、用SPSS11.7統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(()±s)表示。對治療組和對照組炎性因子進(jìn)行組內(nèi)和組間的單因素方差(one=way ANOVA)及SNK法(Student-Newman-Keuls)分析；空白組與治療組和對照組炎性因子及內(nèi)臟淋巴結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果均數(shù)間差別進(jìn)行組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(two independent sample t-test)。
　　 結(jié)果：
　　 1.小鼠精神飲食情況

7、>　　 治療組、對照組與空白組相比小鼠精神萎靡，食欲差，反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)減少。治療組與對照組小鼠精神及飲食情況無明顯差異。
　　 2.血清致炎性介質(zhì)TNF-α、IL-1β含量測定
　　 1)治療組和對照組小鼠血清TNF-α和IL-1β濃度傷后各時(shí)間點(diǎn)均比空白組高(P<0.01)；
　　 2)治療組小鼠血清TNF-α和IL-1β濃度在傷后24h、48h、96h均比對照組低(P<0.01)；
　　 3)治療組

8、和對照組小鼠血清TNF-α和IL-1β濃度均于傷后24h達(dá)到峰值，其峰值均數(shù)分別為3.53±0.63ng/ml，0.48±0.12ng/ml和5.42±0.45 ng/ml，0.33±0.07 ng/ml。
　　 3.血清抗炎介質(zhì)IL-4、IL-10含量測定
　　 1)治療組和對照組小鼠血清IL-4濃度在傷后24h、48h、96h均明顯高于空白組(P<0.01)，血清IL-10濃度在傷后12h、24h、48h、96h均明

9、顯高于空白組(P<0.01)；
　　 2)治療組小鼠血清IL-4濃度在傷后24h、48h、96h均明顯高于對照組(P<0.01)，血清IL-10濃度在傷后12h、24h、48h、96h均明顯高于對照組(P<0.01)；
　　 3)治療組和對照組小鼠血清IL-4、IL-10濃度均隨傷后時(shí)間延長而升高。
　　 4.腸道細(xì)菌移位情況
　　 除空白組外，對照組和治療組內(nèi)臟組織細(xì)菌培養(yǎng)均有菌落形成。治療組細(xì)菌移位量

10、均數(shù)(腸系膜淋巴結(jié)780±28.7、肝臟147±15.3、脾臟254±18.7)明顯低于對照組(腸系膜淋巴結(jié)850±32.8、肝臟180±17.5、脾臟295±28.2)(P<0.01)。
　　 5.各組小腸病理變化結(jié)果
　　 治療組可見小腸腺輕度擴(kuò)大，絨毛被覆上皮完整，排列整齊；燙傷組小鼠小腸粘膜水腫明顯，小腸腺腔擴(kuò)大，絨毛上皮腫脹，部分上皮松散、脫落，腸粘膜下炎性細(xì)胞浸潤，空白組未見異常。
　　 結(jié)論：

11、>　　 1.傷后治療組和對照組小鼠血清TNF-α、IL-1β濃度均數(shù)與空白組比較均明顯升高，但治療組血清TNF-α、IL-1β濃度均數(shù)在傷后24h、48h、96h均明顯低于對照組，說明維生素D對小鼠燙傷后致炎性因子的生成有抑制作用。
　　 2.治療組和對照組小鼠血清IL-4濃度均數(shù)與空白組比較均在傷后24h開始明顯升高，但同一時(shí)間點(diǎn)比較治療組均高于對照組；治療組和對照組小鼠血清IL-10濃度均數(shù)與空白組比較分別在傷后12h和2