抑制內(nèi)源性硫化氫生成加重尿源性膿毒血癥腎損傷的炎癥反應(yīng).pdf

1、目的：
　　建立尿源性膿毒癥家兔模型，應(yīng)用胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）抑制劑DL-炔丙基甘氨酸（DL-Propargylglycine，PAG）抑制內(nèi)源性硫化氫生成，觀察CSE活性的表達(dá)及內(nèi)源性硫化氫生成，比較兔腎組織核因子-κB（NF-κB）及細(xì)胞因子IL-6、TGF-β1的表達(dá)，明確內(nèi)源性硫化氫對尿源性膿毒血癥腎臟細(xì)胞因子表達(dá)的影響，探究硫化氫在尿源性膿毒血癥腎臟功能保護(hù)中的作用機(jī)理。
　　方法：
　　1、選取32

2、只健康雄性家兔，隨即分為4組，每組8只，分別為：control（對照）組；sham（假手術(shù)）組；sepsis（尿源性膿毒癥）組；PAG（DL-炔丙基甘氨酸）組。
　　2、sepsis組家兔予以結(jié)扎一側(cè)輸尿管同時向結(jié)扎點(diǎn)的近端輸注細(xì)菌液（大腸桿菌），建立尿源性膿毒血癥兔模型；PAG組于造模后向腹腔注射DL-炔丙基甘氨酸（37.5mg/kg），sepsis組腹腔注射等量生理鹽水。
　　3、各組按時間點(diǎn)又分為術(shù)前、術(shù)后12h、24

3、h、36h和48h5個亞組，按各個亞組觀察家兔的肛溫（Rectaltemperature，RT）、呼吸頻率（Respiratory rate，RR）及心率（Heart rate，HR）。
　　4、各時間點(diǎn)（術(shù)前、術(shù)后12h、24h、36h和48h）采外周靜脈血測白細(xì)胞數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞數(shù)（N）、肌酐（Cr）及尿素氮（BUN）。
　　5、術(shù)后48h取血測血漿H2S濃度，取腎組織檢測CSE活性。
　　6、術(shù)后48h取

4、各組兔腎標(biāo)本固定并行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察其組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。Western-blot法測腎組織細(xì)胞因子NF-κB、TGF-β1及IL-6的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、生命體征：sham組術(shù)后48h RT、RR、HR與control組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；sepsis組各時間點(diǎn)RT、RR、HR均明顯高于同時間點(diǎn)control組及sham 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;PAG組各時間點(diǎn)RT、

5、RR、HR較同時間點(diǎn)sepsis組升高更顯著（P<0.05）。
　　2、血液檢測指標(biāo)：術(shù)后48h sham組家兔WBC、中性粒細(xì)胞數(shù)、Cr、BUN與control組比較，均無明顯差異（P>0.05）；sepsis組術(shù)后WBC、中性粒細(xì)胞數(shù)、Cr、BUN與control及sham組比較，明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；PAG組WBC、中性粒細(xì)胞數(shù)、Cr、BUN較sepsis組升高更顯著（P<0.05）。
　　3、腎

6、組織CSE活性及血漿H2S含量檢測：sham組術(shù)后48h腎組織CSE活性及血漿H2S含量與control組之間無明顯差異（P>0.05）；sepsis組腎組織CSE活性及血漿H2S含量與control及sham組比較，均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；PAG組腎組織CSE活性及血漿H2S含量較之sepsis組下降更顯著（P<0.05）。各組家兔的腎組織CSE活性與血漿H2S含量呈正相關(guān)關(guān)系，R=0.8505。
　　4、病理

7、學(xué)改變：control組和sham組腎組織結(jié)構(gòu)無明顯異常；sepsis組腎組織結(jié)構(gòu)紊亂，腎小球形態(tài)異常，血管球萎縮、變形，腎小囊擴(kuò)大明顯，腎小管上皮細(xì)胞可見水腫、壞死，壞死細(xì)胞脫落并阻塞管腔，管腔擴(kuò)張，腎間質(zhì)充血、水腫，周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤；PAG組與sepsis組相比較，上述病變加重。
　　5、腎組織NF-κB、IL-6及TGF-β1的蛋白表達(dá)（Western-blot法）：sham組術(shù)后48h腎組織NF-κB、IL-6及T

8、GF-β1的表達(dá)與control組比較，均無明顯差異（P>0.05）；sepsis組及PAG組腎組織NF-κB、IL-6、TGF-β1表達(dá)均高于control組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；PAG組NF-κB、IL-6的表達(dá)較sepsis組升高（P<0.05），PAG組TGF-β1表達(dá)較sepsis組減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、成功復(fù)制尿源性膿毒血癥家兔模型。
　　2、應(yīng)用PAG可