硫化氫對(duì)尿源性膿毒血癥腎細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　復(fù)制尿源性膿毒血癥兔模型；應(yīng)用NaHS（H2S供體）干預(yù)，明確外源性硫化氫對(duì)尿源性膿毒血癥急性腎損害的作用，探討H2S在尿源性膿毒血癥中對(duì)腎細(xì)胞凋亡、NF-κB、Bcl-2、Bax表達(dá)的影響，進(jìn)而揭示H2S對(duì)尿源性膿毒血癥所致腎細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：
　　1、采取結(jié)扎家兔左輸尿管，并向結(jié)扎近端輸尿管內(nèi)注入大腸埃希菌（ATCC25922），以建立因急性上尿路梗阻、感染而引發(fā)的兔膿毒血癥模型；
　　

2、2、將48只健康的雄性家兔(體重：1.8-2.2Kg/只)隨機(jī)分成4組，每組12只。對(duì)照組、假手術(shù)組、尿源性膿毒血癥組（模型組）；硫氫化鈉治療組（治療組）；
　　3、每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按時(shí)間點(diǎn)劃分為5個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)：術(shù)前，術(shù)后12h、術(shù)后24h、術(shù)后36h、術(shù)后48h。分別于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)實(shí)驗(yàn)兔的肛溫(RT)、呼吸(RR)、心率(HR)；
　　4、分別于手術(shù)前，手術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)采血，用以行外周血常規(guī)(WBC、中性粒細(xì)胞)、腎功能(Cr、

3、BUN）的測(cè)定；
　　5、于手術(shù)后48小時(shí)取各組家兔腎臟組織行HE染色，于光學(xué)顯微鏡下，觀察腎臟形態(tài)及其結(jié)構(gòu)的改變，Tunel法檢測(cè)腎臟組織細(xì)胞凋亡；應(yīng)用免疫組化測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)、各組家兔組腎臟組織中的Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)；Western-Blot法檢測(cè)各組家兔腎臟組織NF-ΚB的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各組家兔體溫、呼吸頻率、心率比較：假手術(shù)組與對(duì)照組比較無明顯差異（P＞0.05）；模型組明顯高于對(duì)照組、

4、假手術(shù)組（P＜0.05），治療組明顯低于模型組（P＜0.05）。
　　2.血常規(guī)、腎功能化驗(yàn)結(jié)果表明：各組家兔術(shù)前血常規(guī)（白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞）、肌酐（Cr）、尿素氮（Bun）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后血 WBC、中性粒細(xì)胞；Cr、Bun結(jié)果：對(duì)照組與假手術(shù)組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；模型組明顯高于對(duì)照組、假手術(shù)組（P＜0.05）；治療組與模型組相比有下降趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.病理形態(tài)：

5、
　　微觀形態(tài)學(xué)改變：鏡下（HE染色）：模型組可見腎小球萎縮、變形，并可見大量炎性細(xì)胞浸潤；治療組較模型組上述變化有所減輕。
　　4.免疫組化法檢測(cè)，腎臟組織Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)：對(duì)照組、假手術(shù)組腎臟組織可見Bcl-2、Bax蛋白微弱表達(dá)；Bax蛋白表達(dá)在模型組最強(qiáng)，而Bcl-2蛋白在模型組表達(dá)微弱；治療組較模型組Bax蛋白表達(dá)明顯減弱，而Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　　5.原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記（Tunel）法

6、,檢測(cè)腎臟組織細(xì)胞凋亡：對(duì)照組、假手術(shù)組腎臟組織可見散在的少量的腎小管上皮細(xì)胞凋亡。模型組可見成片的細(xì)胞凋亡以及凋亡小體的形成，與對(duì)照組比較 P<0.05。治療組較模型組腎臟組織細(xì)胞凋亡顯著減輕（P<0.05）。
　　6. Western-Blot法檢測(cè)NF-ΚB的蛋白表達(dá)：對(duì)照組與模型組比較：NF-ΚB蛋白表達(dá)無明顯差異；對(duì)照組與模型組比較：模型組 NF-ΚB蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組，于術(shù)后48小時(shí)差異顯著，（P<0.05）有統(tǒng)計(jì)