硫化氫通過調(diào)節(jié)ET-1、MDA、SOD對尿源性膿毒血癥急性腎損傷的保護作用.pdf

1、目的：
　　建立尿源性膿毒癥兔模型，應用NaHS及PAG進行干預，觀察腎組織ET-1、MDA、SOD的變化，揭示硫化氫對尿源性膿毒血癥腎損傷的作用及機制。
　　方法：
　　1.模型的建立：家兔左側(cè)輸尿管內(nèi)注入大腸桿菌（ATCC25922），并結扎左側(cè)輸尿管遠端，模擬上尿路急性梗阻并感染所致膿毒血癥兔模型。將35只健康雄性家兔隨機分成五組(n=7)。正常組（Control組）；假手術組（Sham組）；膿毒血癥組（seps

2、is組）；PAG組（腹腔注射DL-炔丙基甘氨酸）；硫氫化鈉組（耳緣靜脈注射NaHS8.4umol/kg溶液）。
　　2.五組家兔按不同時間點分為術前、術后12h、術后24h、術后36h和術后48h5個時間點，各個時間點均觀察肛溫（Rectal temperature，RT）、呼吸頻率（Respiratory rate，RR）和心率（Heart rate，HR）。
　　3.各時間點（術前、術后12h、24h、36h和48h）采

3、外周靜脈血測白細胞數(shù)（White Blood Cell,WBC）、中性粒細胞數(shù)（neutrophil,N）、肌酐（Creatinine,Cr）、尿素氮（Blood Urea Nitrogen,BUN）。
　　4.術后48h取各組家兔腎組織進行HE染色，利用光學顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察家兔腎組織形態(tài)結構變化。
　　5.術后48h采用PCR法檢測ET-1mRNA和SOD mRNA表達。
　　6.術后48hWestern

4、Blot分析ET-1含量，比色法測定MDA含量和SOD活性。
　　7.術后48h取腎組織檢測CSE的活性,抽血測H2S濃度。
　　結果：
　　1、生命體征：Sham組術后36h和48h的RT、RR、HR與Control組比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；Sepsis組術后各時間點RT、RR、HR均高于同時間點Control組和Sham組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；PAG組術后各時間點的RT、RR、HR較同時間點

5、Sepsis組升高更明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；NaHS組術后各時間點RT、RR、HR與同時間點的Control組和Sham組比較升高，與Sepsis組和PAG組比較出現(xiàn)降低，均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2、外周血細胞計數(shù)：術后12h Sham組家兔WBC和術后12h、24h N出現(xiàn)升高，較Control組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；Sepsis組術后WBC、N與Control及Sham組比較出現(xiàn)

6、升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；PAG組WBC、N較sepsis組升高更顯著（P<0.05）；NaHS組術后各時間點WBC、N與同時間點的Control組和Sham組比較升高，與Sepsis組和PAG組比較出現(xiàn)降低，具有明顯差異（P<0.05）。
　　3、腎功能：Control組和Sham組腎功能指標（Cr、BUN）對比無差異（P>0.05）；Sepsis組術后Cr、BUN較Control及Sham組顯著升高，差異有統(tǒng)計學

7、意義（P<0.05）；PAG組較sepsis組升高更顯著（P<0.05）；NaHS組與同時間點的Control組和Sham組比較升高，與Sepsis組和PAG組比較出現(xiàn)降低，具有明顯差異（P<0.05）。
　　4、病理學改變：HE染色光鏡：Sepsis組腎組織結構異常，腎小球變形、腎小囊明顯擴大，腎小管上皮細胞出現(xiàn)萎縮、腫脹、壞死，管腔擴張，腎間質(zhì)充血、水腫，周圍可見大量中性粒細胞；PAG組較Sepsis組腎組織結構及形態(tài)出現(xiàn)異常

8、更加嚴重；NaHS組較Sepsis組上述變化稍減輕。電鏡：Sepsis組腎間質(zhì)出現(xiàn)水腫，腎小管上皮細胞萎縮、內(nèi)線粒體排列錯亂并出現(xiàn)水腫、數(shù)量減少，管腔明顯狹窄。PAG組較Sepsis組上述情況更嚴重；NaHS組較Sepsis組上述情況有所減輕。
　　5、ET-1 mRNA和SOD mRNA表達: Control組和Sham組術后48h腎組織ET-1 mRNA和SOD mRNA表達對比無明顯差異（P>0.05）；Sepsis組ET-

9、1 mRNA較Control組增加，PAG組較Sepsis組增加更為明顯，NaHS的ET-1 mRNA表達較Control組增加而較Sepsis組和PAG組降低，比較均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Sepsis組SOD mRNA表達較Control組減少，PAG組較Sepsis組減少更為明顯，NaHS的SOD mRNA表達較Control組減少而較Sepsis組和PAG組增加，比較均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　6、MD

10、A、ET-1及SOD活性：Control組和Sham組術后48h腎組織MDA、ET-1、SOD表達對比無明顯差異（P>0.05）；Sepsis組MDA含量和ET-1含量較Control組增加，PAG組較Sepsis組增加更為明顯，NaHS的MDA含量和ET-1含量較Control組增加而較Sepsis組和PAG組降低，比較均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。五組中PAG組的SOD活性最低，較其余四組比較具有明顯差異（P<0.05）；Sep

11、sis組SOD活性較Control組和Sham組降低，NaHS組SOD活性較Control組降低而較Sepsis組升高，比較具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　7、腎組織CSE活性及血漿H2S含量：Control組和Sham組術后48h腎組織CSE活性及血漿H2S含量對比無明顯統(tǒng)計學意義（P>0.05）；Sepsis組和NaHS組較Control組和Sham組的術后48h腎組織CSE活性降低（P<0.05）；Sepsis組腎組織

12、CSE活性較NaHS組下降更為顯著（P<0.05），PAG組腎組織CSE活性較Sepsis組下降更為顯著（P<0.05）。Sepsis組血漿 H2S含量較 Control組和 Sham組出現(xiàn)明顯降低（P<0.05）；PAG組較Sepsis組下降更多（P<0.05）。
　　結論：
　　1、成功建立尿源性膿毒血癥家兔模型。
　　2、PAG能夠抑制內(nèi)源性硫化氫生成，加重腎功能損害，應用NaHS增加外源性H2S，可減輕尿源性膿