肝素芐基酯制備及肝素廢水蛋白回收研究.pdf

1、IIII摘要肝素具有良好的抗凝血作用，目前被普遍用于手術(shù)治療過程和抗靜脈血栓形成等臨床實踐中，其臨床應(yīng)用價值是至今任何一種藥物都無法替代的。其中伊諾肝素鈉是目前研究最廣、循證醫(yī)學(xué)最多、使用最多的肝素類藥品，占據(jù)肝素藥物市場份額的50%以上。依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝中最關(guān)鍵的是肝素芐基酯制備，其酯化程度的不同，決定了分子量的大小，得率和效益。同時，在肝素生產(chǎn)中，傳統(tǒng)抗凝血特性的效價測定主要依賴肉眼判斷，試驗誤差大；采用國外試劑則價格昂貴。一種便

2、于操作，成本較低且客觀，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的效價測定方法，對提升中小企業(yè)肝素品質(zhì)控制、降低生產(chǎn)成本、提高生產(chǎn)效益具有重要意義。此外，我國肝素加工廢水約6000td，肝素在動物體內(nèi)多以糖蛋白復(fù)合物的形式存在，生產(chǎn)中要用酶將肝素和蛋白分離，所以廢水為富含氨基酸的高鹽度有機(jī)物，COD值高，味道難聞，對環(huán)境污染大。但如果能回收廢水中蛋白和有機(jī)物，不僅能減輕或清除環(huán)境污染，且能變廢為寶，具有較好的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)效益。針對以上情況，本論文主要研究了肝素芐基

3、酯超聲波輔助制備的優(yōu)化；單通道凝血儀和兔全血法測定肝素鈉效價；肝素鈉廢水蛋白沉淀回收。1、在肝素芐基酯的制備中：首先利用甲醇純化原料，利用紫外分光度計和高效液相色譜進(jìn)行了蛋白質(zhì)、核酸和多硫酸軟骨素的檢測；然后通過單因素實驗，確定了超聲波功率、時間對酯化率的影響。最后在此基礎(chǔ)上利用designexpert軟件優(yōu)化設(shè)計實驗，得到最佳工藝參數(shù)為：溫度控制在3540度，功率為400W，超聲反應(yīng)時間5.5h，處理酯化率優(yōu)于對照樣(反應(yīng)25小時)的

4、酯化率（4.65%），為5.35%，經(jīng)純化蛋白核酸含量明顯降低，原料不含多硫酸軟骨素。2、利用羊血漿活化凝血活酶時間來測定肝素鈉效價的同時引入單通道凝血儀，實現(xiàn)微量、自動化操作。同時與中國藥典的兔全血法作對比。均采用中國藥典生物效價（3.3）法進(jìn)行統(tǒng)計計算，經(jīng)可行性檢測證明測定的樣品效價PT準(zhǔn)確可行兩種方法的可行限率均符合藥典要求。單通道凝血儀APTT法測得效價為90.65IUmg，兔血法測得效價為92.96IUmg。3、肝素鈉廢水蛋白

5、沉淀回收的試驗中：先初篩蛋白絮凝劑，再通過單因素試驗，確定了絮凝劑FeCl3、膨潤土、硅藻土的添加量，pH值對蛋白沉淀量的影響，在此基礎(chǔ)上，采用BoxBenhnkenDesign（Designexpert.v8.0.6.1）設(shè)計響應(yīng)面試驗，得到的較佳工藝參數(shù)為：pH7.5、沉淀劑FeCl30.38%、膨潤土1.9%、硅藻土4.25%時，腸衣肝素廢水蛋白沉淀率達(dá)51.13%，廢水溶液變清澈，COD去除率達(dá)80.94%。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：依諾肝