新型超純低分子肝素的制備方法研究.pdf

1、低分子肝素（LMWH）是由未分級(jí)肝素（UFH）經(jīng)化學(xué)降解或酶降解方法制備的鈉鹽或鈣鹽，亦可以說LMWH是普通肝素的一種升級(jí)產(chǎn)品，其平均分子量為5000D。當(dāng)皮下注射LMWH 時(shí)，其在體內(nèi)的抗Ⅹa的作用要比普通肝素強(qiáng)得多，因此LMWH的開發(fā)與研究越來越被重視，現(xiàn)已成為國內(nèi)外肝素研究的熱點(diǎn)。由于化學(xué)降解法的成本較低，且易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，故在對(duì)LMWH的研究領(lǐng)域中大多是研究LMWH的各種化學(xué)降解方法。
　　 目前，工業(yè)上制備LMWH

2、多采用亞硝酸降解法、β-消去降解法和酶降解法等，而采用過氧化氫降解法制備LMWH的報(bào)道比較少見。考慮到以過氧化氫降解法所得LMWH 產(chǎn)物的優(yōu)勢(shì)在于硫酸化程度較高，成本較低，因此本研究選擇以過氧化氫法降解肝素制備LMWH，并結(jié)合親和色譜法對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化以提高產(chǎn)品中抗Ⅹa 成分的比例。這一研究將對(duì)LMWH的工業(yè)生產(chǎn)起到重要的應(yīng)用參考價(jià)值。
　　 由于降解制備LMWH的肝素原料的質(zhì)量直接決定了產(chǎn)物的質(zhì)量，因此為了獲得質(zhì)量符合肝素降

3、解標(biāo)準(zhǔn)的肝素原料，必須事先對(duì)肝素原料進(jìn)行一系列的精制純化。本研究采用的是鹽解法，即經(jīng)過氧化氫氧化脫色、氯化鈉鹽解、樹脂吸附、沉淀、干燥等工藝步驟對(duì)肝素原料進(jìn)行精制。同時(shí)，在整個(gè)精制過程中，通過對(duì)抗凝效價(jià)、pH值、旋光度及分子量和分子量分布的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)來確定精制所用的時(shí)間，并得到最優(yōu)工藝條件：氯化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％，鹽解pH值為9 ～10，醇沉體積分?jǐn)?shù)為60％，雙氧水體積分?jǐn)?shù)為2％。所獲得的肝素精品的效價(jià)比粗品平均提高了1.3倍，且回收率達(dá)

4、85％以上，達(dá)到了精制的目的，為下一步的降解制備LMWH提供了符合要求的原料。
　　 為了研制出一種抗Ⅹa 效價(jià)高，而抗Ⅱa活性低的新型超純LMWH，本研究用銅離子為催化劑，以降解過程中的溫度（A）、時(shí)間（B）、過氧化氫的濃度（C）、溶液的pH值（D）為因素，采用正交設(shè)計(jì)法獲得最優(yōu)工藝條件，并進(jìn)一步采用GPC法測(cè)定產(chǎn)物L(fēng)MWH的分子量及其分布，用生色底物法測(cè)定LMWH的抗Ⅹa值和抗Ⅱa值。結(jié)果顯示，當(dāng)過氧化氫濃度為2％，溫度為6

5、0 ℃，反應(yīng)時(shí)間為1h，pH值為7 時(shí)，所獲得的LMWH 產(chǎn)物的重均分子量為3773D，分子量大于8000D的組分占2.1％，分子量小于2000D的組分占5.4％，抗Ⅹa 效價(jià)為585IU/mg，抗Ⅱa 效價(jià)為11IU/mg，二者的比值高達(dá)53.2。
　　 本研究建立了一種新的化學(xué)降解肝素的工藝，同時(shí)結(jié)合親和色譜法篩選抗Ⅹa有效成分，從而開發(fā)出一種溶血栓活力高而抗凝血活力低的新型抗血栓肝素類藥物。本研究為進(jìn)一步研究超純低分子肝素