鼠疫雙組分疫苗的免疫學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、目的：本課題以提取的鼠疫F1抗原和重組鼠疫V抗原免疫小鼠，豚鼠兩種動(dòng)物模型，評(píng)價(jià)鼠疫亞單位疫苗的免疫效果，為鼠疫疫苗研制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：1.在小鼠動(dòng)物模型上，本課題用F1和rV與氫氧化鋁進(jìn)行物理混合后免疫小鼠。通過脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子，流式細(xì)胞分析術(shù)和抗體滴度的測(cè)定四種方法對(duì)F1和rV蛋白疫苗的免疫原性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。2.在豚鼠動(dòng)物模型上，實(shí)驗(yàn)采用不同劑量的F1和rV抗原與氫氧化鋁佐劑進(jìn)行物理混合后免疫

2、豚鼠，以探求合適的疫苗濃度；通過分離免疫后不同時(shí)間的外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行增殖實(shí)驗(yàn)，對(duì)疫苗末次注射八周后的豚鼠進(jìn)行過敏性遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，并測(cè)定免疫后不同時(shí)間抗體滴度等實(shí)驗(yàn)，對(duì)F1和rV蛋白疫苗的免疫原性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。3.在疫苗效力保護(hù)實(shí)驗(yàn)中，通過不同劑量的鼠疫雙組分疫苗免疫小鼠，并于一周后用一定劑量的鼠疫菌株對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行攻擊，選擇一定的時(shí)間對(duì)小鼠脾臟的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)，從而觀察疫苗的保護(hù)效果。
　　 結(jié)果：1.小鼠動(dòng)物模型結(jié)果

3、：ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示F1+rV+Al(OH)3組有較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答；ELISPOT，MTT細(xì)胞增殖結(jié)果顯示F1+rV+Al(OH)3組在不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)F1，rV抗原刺激后分泌IFN-r的脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)均高于其余各組。2.豚鼠動(dòng)物模型結(jié)果：ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示各疫苗組均有較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答，同時(shí)活疫苗組對(duì)F1抗原特異性的體液IgG效價(jià)明顯高于其余各組，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MTT細(xì)胞增殖結(jié)果顯示不同劑量的疫苗組F1+rV組及活疫苗組在

4、不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)F1，rV抗原刺激后的增殖與陰性對(duì)照組無顯著性差異；遲發(fā)型超敏反應(yīng)顯示F1+rV復(fù)合疫苗能介導(dǎo)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。3.疫苗效力保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組有數(shù)量不等的菌落生長(zhǎng)，而疫苗組小鼠脾臟均無細(xì)菌生長(zhǎng)。
　　 結(jié)論：鼠疫雙組分疫苗能引起小鼠和豚鼠明顯的免疫應(yīng)答，Al(OH)3佐劑能夠顯著提高其應(yīng)答水平，同時(shí)對(duì)小鼠具有一定的保護(hù)力。確證了其與氫氧化鋁佐劑物理混合后能夠激發(fā)高水平的免疫應(yīng)答，為進(jìn)一步研制新型鼠疫疫苗奠定