結核桿菌蛋白亞單位疫苗的免疫學評價.pdf

1、結核病是一種古老的疾病，早在十七世紀就已經(jīng)存在。目前，由于全世界感染人口基數(shù)大，耐藥結核病例大大增加和HIV/TB共感染情況嚴重，結核病正對人類構成巨大的威脅。為了預防結核病，全球已經(jīng)半個多世紀前廣泛接種了卡介苗BCG，但是BCG的免疫保護效果并不理想。隨著生物技術的發(fā)展，很多新型疫苗正在陸續(xù)開發(fā)，例如重組卡介苗，減毒疫苗，蛋白疫苗和DNA疫苗等。他們各自都有不同的優(yōu)勢，但是否可以超越BCG的免疫保護效果還有待臨床證明。
　　在人

2、群中給予結核桿菌疫苗免疫是防治結核感染、控制局部爆發(fā)流行最有效的措施。結核疫苗主要有兩大類:活的結核桿菌疫苗和亞單位疫苗。結核亞單位疫苗雖然免疫原性沒有活的結核桿菌疫苗強，但其免疫效力不受預先接觸環(huán)境分枝桿菌和結核分枝桿菌的影響，而且背景清楚，安全性好，制備簡單，可以用于成人強化免疫，是控制結核病爆發(fā)的理想疫苗。亞單位疫苗有三種形式:蛋白質疫苗、DNA疫苗和以病毒為載體的疫苗[1，2]，其中蛋白質疫苗相對最為安全，易于被人們接受。目前，

3、已經(jīng)有超過20種的不同抗原用于誘導抗結核的免疫應答[3，4].
　　分泌性抗原Ag85a屬于Ag85蛋白家族，被認為具有較好的免疫原性。結核桿菌是一種巨噬細胞內寄生菌。結核病的發(fā)生與免疫系統(tǒng)密切相關。故人體對結核桿菌感染的免疫，以細胞免疫為主。在抗結核感染中，CD4+和CD8+T細胞起主要作用。結核桿菌活化的T細胞所釋放出的淋巴因子，包括白介素-2(IL-2)，γ-干擾素(IFN-γ)，它們直接或間接殺傷結核桿菌。
　　本研

4、究采用來源于結核桿菌的重要抗原Ag85a和結核免疫相關的細胞因子IFN-γ與IL-2，以結核分枝桿菌標準株H37R v基因組DNA為模板，擴增Ag85a基因，分別與鼠源IFN-γ和IL-2的基因融合與表達質粒pET28a構建成重組質粒pet28a-Ag85a-IFN-γ和pet28a-Ag85a-IL-2。在大腸桿菌BL21(DE3)中表達去除信號肽的融合蛋白，純化得到Ag85a-IFN-γ和Ag85a-IL-2的融合蛋白。用該蛋白皮下

5、免疫C57BL/6小鼠，并進行免疫效果評價，以期篩選高效的加強免疫的蛋白亞單位疫苗。通過ELISA方法檢測血清中IgG，IgG1和IgG2c水平，我們發(fā)現(xiàn)融合蛋白Ag85a-IFN-γ和Ag85a-IL-2實驗組的免疫球蛋白水平均高于單獨抗原，并且融合蛋白組IgG2c/IgG1的比值大于單獨抗原，并且Ag85a-IL-2的免疫保護效果優(yōu)于Ag85a-IFN-γ;流式細胞術檢測胞內特異性CD4+和CD8T+細胞，Ag85a-IFN-γ和A