石斑魚(yú)虹彩病毒與弧菌聯(lián)合疫苗免疫效果及免疫學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、石斑魚(yú)(Epinephelus)是我國(guó)一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的魚(yú)類(lèi)，目前國(guó)內(nèi)外十分重視石斑魚(yú)養(yǎng)殖及生物學(xué)技術(shù)的研究。隨著石斑魚(yú)人工繁殖技術(shù)的突破，石斑魚(yú)養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，成為沿海漁民新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)，但病害發(fā)生和流行日益頻繁，給石斑魚(yú)的養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。虹彩病毒病和弧菌病是危害石斑魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的最主要的疾病，且這兩類(lèi)疾病經(jīng)?；旌细腥?，因此研制能預(yù)防這兩類(lèi)疾病的聯(lián)合疫苗必將會(huì)大大促進(jìn)石斑魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本文制備了滅活虹彩病毒全細(xì)胞滅活疫苗和

2、弧菌(溶藻弧菌、哈維氏弧菌、創(chuàng)傷弧菌)滅活疫苗，將聯(lián)合疫苗免疫石斑魚(yú)，檢測(cè)聯(lián)合疫苗的免疫效果并進(jìn)行免疫學(xué)評(píng)價(jià)；運(yùn)用RealtimePCR方法對(duì)不同組織中抗菌肽AP、白細(xì)胞介素IL-1β、免疫球蛋白IgM、溶菌酶Lys、NADH脫氫酶亞基2(ND2)、IFN誘導(dǎo)的Mx蛋白等6種免疫相關(guān)基因進(jìn)行定量分析。 一、虹彩病毒與弧菌聯(lián)合疫苗對(duì)石斑魚(yú)的免疫效果 用福爾馬林滅活的三種弧菌滅活菌苗和虹彩病毒全細(xì)胞滅活疫苗制成聯(lián)合疫苗，以腹

3、腔注射的方式免疫石斑魚(yú)，通過(guò)檢測(cè)試驗(yàn)石斑魚(yú)的抗體水平、血清溶菌酶活性、呼吸爆發(fā)、殺菌活性和免疫保護(hù)率來(lái)研究聯(lián)合疫苗對(duì)石斑魚(yú)的免疫效果。結(jié)果表明聯(lián)合疫苗免疫石斑魚(yú)后能顯著提高免疫組抗體水平；免疫后石斑魚(yú)的血清溶菌酶活性最大達(dá)到364.44±25.24 U mL-1，而空白組只有124.44±16.78U mL-1，免疫組溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組；免疫后一周顯著增加了頭腎呼吸爆發(fā)活性，脾臟的呼吸爆發(fā)活性增加不顯著；免疫一周后白細(xì)胞和頭腎細(xì)胞

4、液的殺菌活性提高極顯著，脾臟的殺菌活性提高不顯著；免疫28天后用虹彩病毒和弧菌混合攻毒，聯(lián)合疫苗對(duì)石斑魚(yú)的免疫保護(hù)率達(dá)到77％，試驗(yàn)表明該聯(lián)合疫苗對(duì)虹彩病毒病和弧菌病可起到良好的預(yù)防作用。 二、攻毒后石斑魚(yú)免疫組和對(duì)照組免疫相關(guān)基因表達(dá)譜 分別用弧菌、虹彩病毒、虹彩病毒和弧菌混合后對(duì)免疫組和對(duì)照組攻毒，分別在攻毒后第1、5、12、24、48和72 h提取免疫組和對(duì)照組魚(yú)肝臟、脾臟和頭腎3種組織中的總RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cD

5、NA，利用Realtime PCR方法對(duì)不同組織中抗菌肽AP、白細(xì)胞介素IL-1β、免疫球蛋白IgM、溶菌酶Lys、NADH脫氫酶亞基2(ND2)、IFN誘導(dǎo)的Mx蛋白等6種免疫相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)攻毒后AP的表達(dá)在對(duì)照組3種組織中高于免疫組；攻毒后1h或5h，對(duì)照組IL-1β的表達(dá)水平急劇上升，顯著高于免疫組，之后逐漸下降；攻毒前IgM在脾臟和頭腎有較高的表達(dá)水平，攻毒后IgM在脾臟中出現(xiàn)了不同程度的下調(diào)，在頭腎和肝臟

6、中免疫組與對(duì)照組差異不明顯；攻毒后對(duì)照組Lys在各組織中顯著高于免疫組，在肝臟中上調(diào)幅度最大，頭腎次之，脾臟最??；攻毒后對(duì)照組ND2在各組織中的表達(dá)水平與免疫組差異不顯著；病毒攻毒后Mx表達(dá)水平顯著高于免疫組，而細(xì)菌攻毒后與免疫組之間未出現(xiàn)顯著差異。結(jié)果表明攻毒后可以顯著提高石斑魚(yú)對(duì)照組3種組織中與抗菌和抗病毒免疫相關(guān)基因的表達(dá)，從而抵御細(xì)菌和病毒病原的感染。免疫組攻毒后變化不顯著，可能是因?yàn)槊庖吆篝~(yú)體免疫機(jī)制發(fā)生了相應(yīng)變化，非特異性免