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文檔簡介
1、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一種嚴重危害人類健康的病毒。丙型肝炎由丙型肝炎病毒引起。目前全球約有1.7億~2.0億HCV感染者,此感染者中70%~85%可發(fā)展成為慢性感染,病程可達20~30年,約有20%可發(fā)展成肝硬化,其中又有20%可轉化為肝細胞癌。目前對于HCV慢性感染尚無高效的特異性治療方法,僅局限于采用療效欠佳的聚乙二醇干擾素α和利巴韋林等抗病毒途徑,但副作用較大,因此研制HCV疫苗對于控制HCV
2、流行具有重要意義。由于HCV基因序列存在高度變異性,導致HCV相似株的存在和免疫逃避現象,使HCV得以逃避宿主免疫機制,造成HCV持續(xù)感染,同時不論在體內還是體外,HCV感染后均能產生中和抗體,但這些抗體具有嚴格的毒株特異性,對變異毒株缺乏有效的交叉中和保護作用,因此研制有效的HCV疫苗必須能夠誘導機體產生針對不同HCV株的交叉免疫保護作用。
本研究結合NS區(qū)相關抗原表位在抗HCV免疫反應中具有重要意義的研究結果,在前期七
3、表位序列基礎上增加了三個具有保守意義的NS區(qū)抗原表位。根據HCV免疫反應的主要效應機制為細胞免疫,以T細胞表位為主,B細胞表位為輔,分別從HCV六個基因型中選取具有代表意義的保守表位,理論上可以代表HCV的基本抗原結構,同時考慮中國人種基因頻率較高的HLA分子限制性HCV抗原表位。根據現有資料,本研究在十個表位之間使用了鉸鏈區(qū)作為間隔,以保證各表位有充分的空間旋轉可能。
該重組抗原表位多肽轉化大腸桿菌DH5α后,通過篩選獲
4、得高效表達重組蛋白的工程菌。表達產物以包涵體形式存在,包涵體經洗滌溶解復性及一系列純化步驟后,獲得純度較高的目的蛋白。Westernblot結果顯示純化的重組抗原表位多肽具有良好的抗原反應性。重組抗原表位多肽免疫小鼠和恒河猴后,ELISA實驗檢測結果顯示,該重組抗原表位多肽在小鼠和恒河猴體內獲得了較高的抗體免疫水平。
本研究成功將重組抗原表位多肽HCVe在大腸桿菌DH5α中高效表達,對蛋白表達、復性純化等實驗條件進行了初步
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