海珠抗纖方治療慢性乙型肝炎肝纖維化的臨床研究和機(jī)制探討.pdf

1、目的:觀察海珠抗纖方治療慢乙肝肝纖維化的療效，檢測該方治療前后外周血T細(xì)胞亞群、CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞、TGF-β1水平、HBV特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的水平，探討該方治療慢性乙型肝炎肝纖維化的免疫機(jī)制，為中藥從免疫的角度逆轉(zhuǎn)肝纖維化提供理論基礎(chǔ)，也為中醫(yī)微觀辯證提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、將慢乙肝肝纖維化患者122例隨機(jī)分為三組。治療組62例，給予海珠抗纖方治療，每日1劑，每天3次口服;

2、對(duì)照1組60例，給予安絡(luò)化纖丸治療，6g/次，每日3次;對(duì)照2組給予還原型谷胱甘肽片治療，每次0.4g口服，每天3次，三組療程均為24周。觀察各組治療前后臨床癥狀體征變化，檢測各組治療前后肝功能、血清HBVDNA水平、血清肝纖四項(xiàng)、肝臟Fibroscan彈性值的的變化。
　　 2、將60例慢乙肝肝纖維化患者隨機(jī)分為二組，治療組30例，給予海珠抗纖方治療，每日1劑，每天3次口服;對(duì)照組30例，給予還原型谷胱甘肽片治療，每次0.4g

3、口服，每天3次，兩組療程均為24周;選取健康體檢成人30人為健康對(duì)照組。入選60例慢性乙型肝炎患者中有40例次行肝穿刺術(shù)，做肝組織病理學(xué)檢查。檢測各組治療前后肝纖四項(xiàng)的水平;分別以細(xì)胞內(nèi)表達(dá)IFN-γ作為Th1細(xì)胞亞群的標(biāo)志，細(xì)胞內(nèi)表達(dá)IL-4作為Th2細(xì)胞亞群的標(biāo)志，通過流式細(xì)胞儀細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法檢測各組治療前后Th1/Th2細(xì)胞亞群的變化，通過ELISA雙抗夾心法檢測各組治療前后血清IFN-γ、IL-4水平變化;分析Th1/Th

4、2細(xì)胞亞群與肝纖四項(xiàng)、肝組織病理纖維化分期之間的關(guān)系;觀察海珠抗纖方對(duì)Th1/Th2細(xì)胞亞群的影響。
　　 3、在第二部分研究的基礎(chǔ)之上，通過流式細(xì)胞儀細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法檢測實(shí)驗(yàn)二中治療組和對(duì)照組治療前后血清CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞水平，通過ELISA雙抗體夾心法檢測治療前后二組血清TGF-β1水平，進(jìn)一步研究血清CD4+CD25+Foxp3+Treg、 TGF-β1水平與肝組織病理學(xué)及肝纖四項(xiàng)之間的關(guān)系，觀

5、察海珠抗纖方對(duì)慢乙肝肝纖維化CD4+CD25+Foxp3+Treg、TGF-β1的影響。
　　 4、應(yīng)用HLA-A2作為過篩指標(biāo)，經(jīng)HLA抗體檢測技術(shù)篩選HLA-A2(+)慢乙肝患者共62例。入選HLA-A2陽性慢乙肝患者隨機(jī)分為二組。治療組32例，給予海珠抗纖方治療，每日1劑，每天3次口服;對(duì)照組30例，給予還原型谷胱甘肽片治療，每次0.4g口服，每天3次，療程均為24周。入選患者中有30例行肝穿術(shù)，做肝組織病理檢查，檢測治療

6、前后血清HBVDNA定量及肝纖四項(xiàng)水平;通過流式細(xì)胞儀免疫熒光法檢測二組治療前后CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群、CD4+/CD8+比值;通過流式細(xì)胞儀MHC-肽-五聚體法檢測二組治療前后HBV特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞水平及分泌IFN-γ功能的變化;分析T淋巴細(xì)胞亞群、HBV特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞與肝纖四項(xiàng)、肝組織纖維化分期之間的關(guān)系，觀察海珠抗纖方對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群和HBV特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的影響。
　　

7、結(jié)果:
　　 1、海珠抗纖方治療后慢乙肝肝纖維化患者臨床癥狀及體征較治療前明顯好轉(zhuǎn)(P＜0.05)，肝功能指標(biāo)(ALT、AST、A/G、TBIL)較治療前顯著好轉(zhuǎn)(P＜0.05)，其中治療后ALT、AST改善上優(yōu)于安絡(luò)化纖丸組（對(duì)照1組），與西藥護(hù)肝組（對(duì)照2組）比較無顯著性差異(P＞0.05);治療后A/G比值改善上優(yōu)于安絡(luò)化纖丸組和西藥護(hù)肝組（對(duì)照2組）(P＜0.05)。海珠抗纖方治療后血清HBVDNA定量水平較治療前顯著下

8、降(P＜0.05);安絡(luò)化纖丸組及西藥護(hù)肝組治療前后血清HBVDNA定量無明顯改變(P＞0.05)。海珠抗纖方組及安絡(luò)化纖丸組治療后血清肝纖四項(xiàng)指標(biāo)均較治療前顯著下降(P＜0.05)，肝臟Fibroscan檢測彈性值均較治療前明顯下降(P＜0.05)，兩組治療后血清肝纖四項(xiàng)及Fibroscan彈性值比較無顯著性差異(P＞0.05);西藥護(hù)肝組（對(duì)照2組）治療前后肝纖四項(xiàng)及Fibroscan檢測彈性值雖略有下降，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無顯著性差異

9、(P＞0.05)。
　　 2、慢乙肝肝纖維化患者Th1、Th2細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2比值均較健康對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，與健康對(duì)照組相比Th1下降更為明顯，表現(xiàn)為Th2細(xì)胞亞群水平相對(duì)占優(yōu)勢(shì)。Th1細(xì)胞亞群水平與肝纖四項(xiàng)成負(fù)相關(guān)（r=-0.61，P＜0.05），并且隨著肝臟纖維化分期的增加而下降;Th2細(xì)胞亞群水平與肝纖四項(xiàng)成正相關(guān)(r=0.43，P＜0.05)，并且隨著肝臟纖維化分期的增加而上升;Th1/Th2比

10、值分別與肝纖四項(xiàng)、肝纖維化分期成負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.52，P＜0.05，r=-0.68，P＜0.05。隨著肝纖維化的進(jìn)展，機(jī)體Th1細(xì)胞亞群水平逐漸降低，Th2細(xì)胞亞群水平逐漸升高，Th1/Th2比值逐漸降低，機(jī)體免疫應(yīng)答出現(xiàn)由Th1向Th2漂移的現(xiàn)象。海珠抗纖方治療后Th1細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2比值均明顯升高(P＜0.05)，而對(duì)照組治療前后Th1、Th2細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2比值均無顯著性改變(P＞0.05)

11、。
　　 3、慢乙肝肝纖維化患者治療前血清肝纖四項(xiàng)、TGF-β1及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞亞群水平較健康對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)，治療組治療后血清肝纖四項(xiàng)、TGF-β1及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞亞群水平較治療前顯著降低(P＜0.05);對(duì)照組治療前后血清肝纖四項(xiàng)、TGF-β1及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞亞群水平無明顯改變(P＞0.05)。血清TGF-β1水平與肝纖四項(xiàng)成正

12、相關(guān)，(相關(guān)系數(shù)分別為:rHA＝0.82，P＜0.05;rLN=0.69,P＜0.05;rPCⅢ=0.72,P＜0.05;rC-Ⅳ=0.65,P＜0.05);血清TGF-β1水平與肝臟病理分期成正相關(guān)(r=0.84，P＜0.05)，血清CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞亞群水平與TGF-β1水平及肝臟病理分期成顯著正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為r=0.58，P＜0.05;r=0.55，P＜0.05）。
　　 4、慢乙肝肝纖維化患者治

13、療前CD4+T比例及CD4+/CD8+比值較健康對(duì)照組顯著下降(P＜0.05)，CD8+T比例明顯升高(P＜0.05)，血清CD4+T淋巴細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值與肝臟纖維化病理分期成負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)分別為rCD4+=-0.53，P＜0.05;rCD4+/CD8+=-0.59，P＜0.05）;血清CD8+T淋巴細(xì)胞比例與肝臟纖維化病理分期成正相關(guān)(rCD8+=0.42，P＜0.05)。隨著肝纖維化程度的加重，CD4+T淋巴細(xì)胞比

14、例及CD4+/CD8+比值逐漸下降，CD8+T淋巴細(xì)胞比例逐漸上升，T細(xì)胞亞群的紊亂逐漸加重。海珠抗纖方治療后血清CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD4+/CD8+比值、HBVcore18-27特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞頻數(shù)及產(chǎn)生IFN-γ的頻數(shù)較治療前顯著提高(P＜0.05);CD8+T淋巴細(xì)胞比例、血清HBVDNA水平較治療前顯著下降(P＜0.05);對(duì)照組治療治療前后T淋巴細(xì)胞亞群、HBVDNA水平、HBVcore18-27特異性細(xì)胞毒性T

15、淋巴細(xì)胞頻數(shù)及產(chǎn)生IFN-γ的頻數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、海珠抗纖方能夠改善慢性乙型肝炎肝纖維化患者的臨床癥狀和體征，改善肝功能，升高A/G比值，降低血清HBVDNA含量，降低血清肝纖四項(xiàng)和改善肝臟硬度，其抗纖維化的作用與安絡(luò)化纖丸相比無顯著性差異，但在抑制病毒復(fù)制和改善肝功能指標(biāo)上優(yōu)于安絡(luò)化纖丸。
　　 2、海珠抗纖方可以升高慢乙肝肝纖維化患者血清Th1細(xì)胞亞群水平及Th1/T

16、h2比值，從而糾正Th1/Th2失衡，使機(jī)體免疫功能向Th1細(xì)胞亞群占優(yōu)勢(shì)的方向逆轉(zhuǎn)。還原性谷胱甘肽片對(duì)糾正Th1/Th2失衡無明顯作用。
　　 3、海珠抗纖方能顯著降低慢乙肝肝纖維化患者血清CD4+CD25+Foxp3+Treg及TGF-β1水平，對(duì)血清CD4+CD25+Foxp3+Treg及TGF-β1水平有一定調(diào)節(jié)作用，可以阻斷CD4+CD25+Foxp3+Treg-TGF-β1-HSC三者之間的循環(huán)反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)肝纖維化患者