白細(xì)胞介素11參與丙型肝炎病毒復(fù)制及其逃避宿主細(xì)胞固有免疫的分子機(jī)制研究.pdf

1、據(jù)統(tǒng)計(jì)，丙型肝炎病毒感染人數(shù)全球約1.7億人，占世界總?cè)丝?％。急性HCV感染通常無癥狀，慢性率高達(dá)80％，是肝硬化、肝癌等終末期肝病最常見的原因之一。由于經(jīng)典治療方法聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林治療不良反應(yīng)多，持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答率低，受患者的健康狀況和HCV基因型限制等原因，現(xiàn)在指南首選直接抗病毒藥(DAAs)索非布韋，達(dá)卡他韋以及索非布韋/來地帕韋聯(lián)合治療，治愈率可達(dá)95％以上，比經(jīng)典療法更加有效、安全，耐受性更好，大大降低了肝癌和肝硬化

2、的死亡風(fēng)險(xiǎn)。但HCV的高突變性也使小分子抑制劑的耐藥屏障較低，且尚無有效的疫苗問世。
　　在HCV感染后宿主細(xì)胞可通過激活固有免疫抑制病毒復(fù)制，而病毒也通過一系列復(fù)雜的機(jī)制改變宿主細(xì)胞免疫因子與宿主細(xì)胞維持相對(duì)穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致感染的慢性化。前期利用基因芯片對(duì)HCV感染后的Huh7細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)譜分析和蛋白水平檢測(cè)顯示，HCV感染可以促進(jìn)Huh7細(xì)胞中TXNIP表達(dá)水平顯著上調(diào)。而本研究進(jìn)一步利用RNA干擾技術(shù)也確認(rèn)了TXNIP對(duì)HCV復(fù)制

3、及細(xì)胞自噬具有重要影響。另外，針對(duì)Huh7和Huh7.5.1這兩種HCV易感性顯著不同的同源細(xì)胞株，以往文獻(xiàn)認(rèn)為RIG-Ⅰ突變?cè)斐傻墓逃忻庖吖δ苋笔荋CV在Huh7.5.1細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增強(qiáng)的主要原因，但其識(shí)別機(jī)制仍存在爭(zhēng)議，近期有文獻(xiàn)報(bào)道MDA5也參與識(shí)別HCV，而通過分析兩種細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)TXNIP差異化表達(dá)也是導(dǎo)致Huh7.5.1對(duì)HCV易感的重要原因之一。
　　為了探究HCV與固有免疫的相互作用機(jī)制，尋找HCV挾持宿主因子逃避細(xì)

4、胞固有免疫的更多證據(jù)，將HCV感染后的Huh7和Huh7.5.1細(xì)胞培養(yǎng)上清處理CD81-Huh7細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)上清中存在可溶性因子上調(diào)TXNIP表達(dá)，通過對(duì)HCV感染12h，36h，60h后的Huh7細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，篩選出顯著上調(diào)的細(xì)胞因子IL-11和TNF-α，隨后利用外源性細(xì)胞因子處理Huh7細(xì)胞，在mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL-11顯著上調(diào)Huh7細(xì)胞內(nèi)TXNIP表達(dá)，而TNF-α顯著抑制TXNIP表達(dá)。利用IL-11

5、抑制劑處理Huh7細(xì)胞后也觀察到TXNIP表達(dá)水平和HCV RNA均明顯降低。另一方面，通過對(duì)比檢測(cè)Huh7和Huh7.5.1細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)Huh7.5.1細(xì)胞IL-11表達(dá)量顯著高于Huh7細(xì)胞。這些結(jié)果表明IL-11差異化表達(dá)同樣是Huh7.5.1細(xì)胞對(duì)HCV易感的重要因素之一。另外，通過刺激干擾素通路信號(hào)分子RIG-Ⅰ和MDA5，推斷出Huh7.5.1細(xì)胞MDA5信號(hào)通路存在不足，同時(shí)，刺激Huh7細(xì)胞MDA5可以上調(diào)TXNIP表達(dá)，

6、這為HCV感染逃避細(xì)胞固有免疫的策略提供了新的思路。
　　鑒于TXNIP在機(jī)體正常生理功能和應(yīng)激條件下均發(fā)揮重要作用，而IL-11作為一種可被HCV感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的負(fù)性免疫調(diào)控因子，與HCV復(fù)制及逃避固有免疫作用機(jī)制的研究在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中尚未見報(bào)道，本研究首次揭示了IL-11在HCV感染中誘導(dǎo)TXNIP高表達(dá)的重要作用，初步闡述了其作用機(jī)制，并對(duì)Huh7和Huh7.5.1兩種細(xì)胞株差異性支持HCV感染的機(jī)制提供了新的線索，也為開發(fā)現(xiàn)抗