白細(xì)胞介素27抑制肥大細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、本文分為以下兩個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分 接頭蛋白TAB2信使RNA通過(guò)microRNA-155調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞內(nèi)毒素耐受
　　競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(competing endogenous RNAs，ceRNA)是近幾年新提出的一種RNA轉(zhuǎn)錄體之間的一種新的調(diào)控方式。擁有共同microRNA反應(yīng)元件的RNA轉(zhuǎn)錄體通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合共同的microRNA從而調(diào)控彼此的翻譯。已有研究表明，ceRNA的調(diào)節(jié)方式參與多種基因?qū)δ[瘤發(fā)生的調(diào)控

2、過(guò)程。但是ceRNA的調(diào)節(jié)機(jī)制是否在天然免疫應(yīng)答和內(nèi)毒素耐受中發(fā)揮作用尚未報(bào)道。脂多糖(LPS)刺激巨噬細(xì)胞會(huì)上調(diào)microRNA-155(miR-155)的表達(dá)，在內(nèi)毒素耐受過(guò)程中發(fā)揮作用，miR-155可以靶向LPS-TLR4信號(hào)通路中的多個(gè)分子，包括MyD88，TAB2，SOCS1，β-arrestin2和SHIP1等。我們檢測(cè)了在LPS刺激巨噬細(xì)胞后，上述幾個(gè)分子的表達(dá)豐度及其變化。發(fā)現(xiàn)TAB2 mRNA是在上述分子中表達(dá)最高的

3、，也是變化最劇烈的。SOCS1是一個(gè)誘導(dǎo)性表達(dá)的基因，表達(dá)倍數(shù)有明顯增加。我們提出假設(shè):這些分子之間會(huì)不會(huì)通過(guò)miR-155形成一個(gè)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在內(nèi)毒素耐受中發(fā)揮作用？我們通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)，揭示了巨噬細(xì)胞中TLR4信號(hào)通路中接頭蛋白TAB2與TLR4通路的負(fù)向調(diào)節(jié)分子SOCS1，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合miRNA-155，TAB2 mRNA可能以ceRNA的方式上調(diào)SOCS1的蛋白表達(dá)，從而在巨噬細(xì)胞內(nèi)毒素耐受過(guò)程中發(fā)揮精細(xì)調(diào)節(jié)作用。
　　首先，構(gòu)建了

4、TAB23'UTR穩(wěn)定過(guò)表達(dá)的小鼠巨噬RAW264.7細(xì)胞系，誘導(dǎo)內(nèi)毒素耐受的模型，與對(duì)照細(xì)胞相比，可以檢測(cè)到此細(xì)胞系中SOCS1蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)，而分泌的細(xì)胞因子IL-6和TNF-α水平相應(yīng)的下降。用siRNA敲減RAW264.7中TAB2 mRNA的表達(dá)，檢測(cè)到SOCS1蛋白表達(dá)顯著下降，同時(shí)細(xì)胞上清中的IL-6和TNF-α的含量相應(yīng)地升高。為了說(shuō)明TAB2 mRNA調(diào)控SOCS1蛋白是依賴于miR-155，同時(shí)干擾miR-155

5、和TAB2 mRNA的表達(dá)，在上述內(nèi)毒素耐受的細(xì)胞模型中則SOCS1的蛋白水平則無(wú)明顯變化。這說(shuō)明，TAB2 mRNA除了作為信使RNA翻譯目的蛋白質(zhì)外，還可能在microRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮作用，通過(guò)microRNA去間接調(diào)控其他基因的蛋白水平。
　　上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在內(nèi)毒素耐受的巨噬細(xì)胞中，TAB2 mRNA通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合miRNA-155，導(dǎo)致結(jié)合到SOCS1mRNA上的miR-155減少，從而上調(diào)SOCS1蛋白的表達(dá)，從

6、而在內(nèi)毒素耐受中的調(diào)控中發(fā)揮作用。上述研究初步揭示了ceRNA可能是參與內(nèi)毒素耐受調(diào)控的一種新的方式，為深入研究?jī)?nèi)毒素耐受的機(jī)制提供了新的認(rèn)識(shí)，也可能為感染性疾病的診斷和治療提供新的思路。
　　第二部分 白細(xì)胞介素27抑制肥大細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答及其機(jī)制研究
　　白細(xì)胞介素27（Interleukin27，IL-27）最初是作為可以促進(jìn)Th1型應(yīng)答而被認(rèn)知的一種細(xì)胞因子，而隨后的研究證明IL-27具有重要的抑制炎癥的功能。肥大

7、細(xì)胞是介導(dǎo)過(guò)敏反應(yīng)的主要效應(yīng)細(xì)胞，也是lgE相關(guān)疾病主要的效應(yīng)細(xì)胞。我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，IL-27處理后肥大細(xì)胞表面IL-27受體亞基WSX-1和gp130的表達(dá)上調(diào)，WSX-1缺陷的小鼠來(lái)源的肥大細(xì)胞對(duì)IgE觸發(fā)的應(yīng)答增強(qiáng)，提示IL-27可能對(duì)肥大細(xì)胞的功能具有調(diào)控作用。本研究的目的是研究IL-27對(duì)肥大細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的抑制效應(yīng)及其相關(guān)機(jī)制。
　　我們利用WSX-1缺陷和野生型的小鼠，建立了肥大細(xì)胞活化為主的三個(gè)疾病模型:被動(dòng)

8、性全身超敏反應(yīng)、被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)和慢性氣道炎癥模型。結(jié)果顯示:與野生型(WT)小鼠比較，IL-27受體亞基WSX-1缺陷的小鼠（WSX-1-/-）的小鼠表現(xiàn)出更嚴(yán)重的全身性過(guò)敏反應(yīng)和局部皮膚過(guò)敏反應(yīng)，相應(yīng)的血中組胺產(chǎn)生水平也升高。慢性氣道炎癥模型顯示:WSX-1-/-的小鼠肺臟中有更嚴(yán)重的炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，以噬酸性細(xì)胞和杯狀細(xì)胞浸潤(rùn)為主，WSX-1-/-的小鼠有更多的Th2型、炎性相關(guān)細(xì)胞因子包括IL-4，IL-5，IL-13等的分泌。在

9、體外用重組IL-27處理WT和WSX-1-/-小鼠骨髓來(lái)源的肥大細(xì)胞，WSX-1-/-來(lái)源的肥大細(xì)胞分泌更多的Th2型和炎性相關(guān)的細(xì)胞因子，并且脫顆粒程度較之野生型小鼠來(lái)源的肥大細(xì)胞有明顯增加。與野生型(WT)小鼠相比，WSX-1-/-小鼠骨髓來(lái)源的活化的肥大細(xì)胞，其主要信號(hào)途徑Grb2/PLC-γ1/SLP-76和旁路信號(hào)通路PI3K/Akt/IκBα，以及下游的MAPK和鈣離子流有明顯的增強(qiáng)，而且連接FcεRI受體和下游信號(hào)的關(guān)鍵分