PIASy抑制ISGs轉錄活性的分子機制.pdf

1、背景：干擾素是機體細胞應對病毒及其他生物刺激分泌的一類小分子糖蛋白。其中，I型干擾素可通過激活胞內 JAK-STAT通路啟動眾多ISGs的轉錄，如MX蛋白、IFIT蛋白等。但當ISGs過度激活時，可能導致機體出現免疫過度，甚至會導致自身免疫性疾病的發(fā)生。PIAS蛋白是一類能抑制活化的STATs轉錄活性的蛋白，從而參與ISGs的負調控過程。此外有研究發(fā)現，PIASy還可通過結合HDAC1及HDAC2降低目的基因啟動子區(qū)域的組蛋白乙?；揎?/p>

2、，從而抑制Smad和AR基因的轉錄活性。
　　目的：尋找在ISGs的負調控作用中，PIASy可能互相作用的組蛋白修飾酶，并從表觀遺傳學角度研究PIASy抑制ISGs轉錄活性的分子機制。
　　方法：通過蛋白質免疫共沉淀技術（Co-IP）和質譜技術，尋找與PIASy相互作用的組蛋白修飾酶，并使用熒光定量PCR（RT-PCR）及染色質免疫共沉淀技術（Ch-IP）研究PIASy對ISGs基因轉錄及啟動子區(qū)域組蛋白修飾的影響；通過分子

3、克隆方法構建包含不同結構域的PIASy和RBP2重組質粒，并應用Co-IP技術尋找兩者相互結合的結構域；構建穩(wěn)定表達不同結構域PIASy的細胞，并通過RT-PCR和Ch-IP研究不同結構域對ISGs基因轉錄及啟動子區(qū)域組蛋白修飾的影響。
　　結果：PIASy可與RBP2相互作用，且在PIASy+/+的MEF細胞中，其MX1、IFIT1啟動子區(qū)域的組蛋白 H3K4me3水平顯著低于 PIASy-/-細胞，從而抑制其轉錄活性，轉錄水平

4、較低；PIASy主要通過其N端的1-218AA的區(qū)域與RBP2的JmjC結構域相互結合；與此一致的是，在穩(wěn)定表達包含有PIASy蛋白1-218AA區(qū)域的PIASy-/-細胞中，其MX1啟動子區(qū)域的組蛋白 H3K4me3水平較 PIASy-/-細胞明顯下調，從而可抑制其轉錄活性。
　　結論：結果表明PIASy可通過其N端1-218AA的區(qū)域招募RBP2蛋白，下調ISGs（MX1、IFIT1）啟動子區(qū)域的組蛋白H3K4me3水平，從而