EPRS、TNFAIP3-A20對(duì)重癥急性胰腺炎早期保護(hù)作用的探討.pdf

1、背景：
　　重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是臨床常見的消化系統(tǒng)疾病，其中20％-25%的病人病情易加重，可出現(xiàn)局部或全身并發(fā)癥、多器官功能衰竭甚至威脅生命。SAP治療方法包含內(nèi)科、外科、中醫(yī)科等，以內(nèi)科治療為主，且該病具有起病急、病情兇險(xiǎn)、發(fā)病率較高的疾病，SAP易并發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征（systematic inflammatory response syndrome，SIRS），因

2、此，針對(duì)SIRS尋找特異性靶點(diǎn)抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展可能是一條出路。
　　目的：
　　1.TNFAIP3/A20在胰腺和肝臟組織中的表達(dá)情況，探討IKK/IκB/NF-ΚB信號(hào)通路在SAP（severe acute pancreatitis。SAP）大鼠胰腺早期的激活狀況。
　　2.谷氨酸-酰胺酸-tRNA合成酶(glutamyl-prolyl-tRNA synthetase。EPRS)在胰腺和肝臟組織中的表達(dá)情況，并探討

3、IKK/IκB/NF-ΚB信號(hào)通路及其相關(guān)蛋白在SAP大鼠發(fā)病早期的相關(guān)發(fā)生機(jī)制。
　　方法：
　　1.逆行胰膽管注射5%牛黃膽酸鈉建立SAP模型
　　(1)96只將成年SD（Sprague-Dawley）大鼠，雌性，隨機(jī)分為DEX治療組（32只），SAP模型組（32只），SO組（32只）等三組；分別按照2、6、12、24小時(shí)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)各處死老鼠8只。DEX治療組和SAP模型組大鼠采用逆行胰膽管注射5%牛黃膽酸鈉（so

4、dium taurocholate，STC）(0.1ml/100g)建立SAP模型，SO組大鼠用生理鹽水替代STC。DEX組大鼠下肢肌注0.5mg/100g地塞米松治療，其余兩組不干預(yù)。心臟取血方式處死大鼠。
　　(2)取胰腺、肝臟組織行HE染色觀察胰腺、肝臟病理?yè)p傷。
　　(3)生化試劑盒檢測(cè)血清淀粉酶（AMS）。
　　2.ELISA法檢測(cè)NF-κB信號(hào)通路相關(guān)因子，免疫組化及RT-PCR法檢測(cè)EPRS的表達(dá)

5、　?。?）ELISA法測(cè)胰腺組織中IκB、TLR4、INF-γ、NF-κB蛋白含量。
　?。?）免疫組化法檢測(cè)肝臟組織中EPRS蛋白定性表達(dá)情況。
　?。?）定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)（RT-PCR）測(cè)定胰腺、肝臟組織中EPRS mRNA的表達(dá)情況。
　　3.ELISA法檢測(cè)NF-κB信號(hào)通路相關(guān)因子，免疫組化及RT-PCR法檢測(cè)TNFAIP3/A20的表達(dá)
　?。?）ELISA法測(cè)胰腺組織中IκB、TLR4、INF-

6、γ、NF-κB蛋白含量。
　?。?）免疫組化法檢測(cè)胰腺組織中TNFAIP3/A20蛋白定性表達(dá)情況。
　　（3）定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)（RT-PCR）測(cè)定胰腺、肝臟組織中TNFAIP3/A20 mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.SO組、SAP組、DEX組模型血清淀粉酶及病理結(jié)果的比較
　　（1）SAP組、DEX組大鼠血清淀粉酶均較SO組血清升高，DEX組血清AMS較SAP組降低。
　?。?）HE

7、胰腺病理評(píng)分示DEX組各時(shí)間點(diǎn)炎癥損傷SAP組大鼠明顯減輕（P＜0.01），以24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)尤為明顯。且SAP組、DEX組胰腺炎癥損傷隨時(shí)間推移損傷加重（P＜0.05），而各時(shí)間點(diǎn) SO組胰腺輕度水腫，損傷無(wú)明顯變化。DEX組、SAP組肝臟病理炎癥損傷隨時(shí)間增加而加重，于24h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到高峰，DEX組各時(shí)段較SAP組炎癥損傷減輕（P<0.05），而各時(shí)間點(diǎn)SO組肝臟炎性損傷無(wú)明顯變化。
　　2.NF-κB、IκB、TLR4、INF

8、-γ及EPRS的表達(dá)
　?。?）用ELISA檢驗(yàn)法測(cè)定DEX組、SAP組大鼠中肝臟NF-κB、IκB、TLR4、INF-γ含量在6小時(shí)時(shí)間點(diǎn)達(dá)到高峰，DEX組各時(shí)間點(diǎn)肝臟NF-κB、IκB、TLR4、INF-γ含量較SAP組降低，而SO組各指標(biāo)不隨時(shí)間變化。
　?。?）RT-PCR結(jié)果示DEX組胰腺、肝臟EPRS mRNA表達(dá)量較SAP組升高，6h DEX組胰腺EPRS mRNA較SAP、SO組明顯升高。
　　（3）6

9、 h時(shí)間點(diǎn)SO組大多數(shù)大鼠肝臟EPRS蛋白為弱表達(dá),而SAP組則為弱表達(dá)與強(qiáng)表達(dá)參半，DEX組則絕大多數(shù)為強(qiáng)表達(dá)。6h時(shí)間點(diǎn)SO組、SAP組和DEX組，三組EPRS蛋白表達(dá)差異明顯(P<0.01)；6h時(shí)間點(diǎn)SO組、SAP組和DEX組三組進(jìn)行EPRS蛋白含量?jī)蓛杀容^，SO組與SAP組無(wú)明顯差異,而SO組與DEX組，SAP組與DEX組差異具有顯著性，6h DEX組EPRS蛋白表達(dá)較6 h SAP組表達(dá)增加，EPRS蛋白在三組大鼠胰腺表達(dá)不

10、明顯。
　　3.NF-κB、IκB、TLR4、INF-γ及TNFAIP3/A20的表達(dá)
　?。?）DEX組胰腺NF-κB、IκB含量較SAP組降低，SO組無(wú)明顯變化。TLR4、INF-γ在各組胰腺組織內(nèi)無(wú)明顯表達(dá)。
　　（2）RT-PCR結(jié)果示DEX組胰腺TNFAIP3/A20較SAP、SO組明顯升高。
　?。?）免疫組化結(jié)果示DEX組TNFAIP3/A20表達(dá)較SO組、SAP組增多，且隨時(shí)間變化呈遞增趨勢(shì)。