生物質(zhì)譜的新技術(shù)與新方法的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文生物質(zhì)譜的新技術(shù)與新方法的研究姓名：宋浩威申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：楊芃原2001.5.30摘要在第二章所述的研究工作中發(fā)展了一種極具潛力的蛋白質(zhì)兩維分離鑒定新技術(shù)：毛細管等電聚焦(CLEF)一質(zhì)譜(MS)聯(lián)用技術(shù)，并利用該技術(shù)得到了同2DPAGE相類似大腸桿菌全蛋白的2維譜圖。本論文工作采用特制的等電聚焦系統(tǒng)和在線的CLEFMS接口，創(chuàng)新地提出與實現(xiàn)了聚焦毛細管和電噴霧針一體化設(shè)計，因而在聚焦和測定

2、的轉(zhuǎn)換過程中不用切斷聚焦高壓，只需調(diào)節(jié)電噴霧針的位置，整個過程可在15s之內(nèi)完成，聚焦好的蛋白質(zhì)不會散焦，整個過程操作簡便，重現(xiàn)性高。利用標準蛋白溶液，實驗得到了最佳的聚焦時間、兩性電解質(zhì)濃度、聚焦溶液流出速度、緩沖溶液流速等，并根據(jù)CIEFMS的特殊要求，實驗得到了最佳的質(zhì)譜測定條件。針對CIEFMS對樣品溶液低鹽、高穩(wěn)定性的特殊要求，探索并得到了一套實用的樣品處理方法，為利用CIEF—Ms進行實際樣品測定奠定了基礎(chǔ)。利用此技術(shù)已經(jīng)得

3、到了較好的大腸桿菌全蛋白的2維譜圖。第三章所述的論文工作提出了一種基于模式相關(guān)原理的新算法，用于生物質(zhì)譜的蛋白質(zhì)CID譜圖的解析工作，可以從肽段的CID譜圖中自動找出可能的氨基酸序列，具有準確度高、容錯性好等優(yōu)點。該算法主要特點在于：1、在傳統(tǒng)的相關(guān)算法的基礎(chǔ)之上發(fā)展了一套模式相關(guān)技術(shù)，把肽段在質(zhì)譜CID中的斷裂規(guī)律融于相關(guān)得分的計算中，使得可能氨基酸序列的搜索高效、準確并具有較高的容錯性；2、序列模式的產(chǎn)生是一個自動迭代的過程，不需要

4、人工干預(yù)；3、可以對未知蛋白的氨基酸序列進行預(yù)測。通過該算法對大量已知蛋白酶解肽段的CID譜圖進行了解析，研究表明其既具有傳統(tǒng)相關(guān)算法的高容錯性、高準確度的優(yōu)點，又具有Denovo算法計算量小、可以預(yù)測未知蛋白的特性。在同PE公司的SCIEXAPI165質(zhì)譜所帶的商用解譜軟件的比較中具有明顯的優(yōu)勢。第四章中所涉及的工作主要利用質(zhì)譜、毛細管電泳及高效液相色譜對蛋白質(zhì)的去折疊及蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)之間的反應(yīng)進行了初步研究。主要研究內(nèi)容如下：1、利