黃連、姜黃連抗菌譜及其物質(zhì)基礎(chǔ)比較研究.pdf

1、黃連是一味常用清熱解毒中藥，生用苦寒較甚,易傷脾胃,不易久服。臨床上，根據(jù)不同病癥，有多種黃連炮制品使用。黃連的炮制品種類繁多,見諸歷代文獻的炮制品達24種之多。其中酒黃連、姜黃連、萸黃連一直沿用至今,2010版藥典亦有收載。
　　黃連經(jīng)姜制后,可緩和苦寒之性,并善制胃火嘔吐。黃連為清熱瀉火之要藥,生姜有溫胃止嘔之功，為嘔家之圣藥，以姜汁制黃連，既可緩和黃連苦寒之性，又可清胃熱之火，取生姜之降逆,藥進后方不至于反出。
　　姜

2、黃連提取采用滲漉法，以正交實驗設(shè)計，對黃連及姜黃連的提取工藝進行篩選，以溶劑用量、浸漬時間、流速以及乙醇濃度為四個考察因素。以浸膏得率、主要生物堿及總堿含量、抗菌作用為考察指標，綜合評價實驗結(jié)果，篩選出最佳提取工藝。結(jié)果：以70％乙醇為溶劑，浸漬時間18小時，總?cè)軇┯昧繛轱嬈亓?倍。流速影響因素不具有顯著性差異。
　　為明確黃連、姜黃連主要生物堿含量差異，對黃連及姜黃連主要化學成分進行分析，結(jié)果顯示姜黃連較生黃連生物堿含量均有增

3、加。藥根堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿五種生物堿在不同提取物中增加率分別為：乙醇提取物：166.67%、130.56%、164.23%、60.56%、40.91%，二氯甲烷部位：28.74%、87.88%、7.89%、18.22%、30.53%，乙酸乙酯部位：72.16%、266.67%、160.92%、128.74%、113.33%，正丁醇部位：18.43%、13.04%、5.68%、64.42%、28.75%。其中乙酸乙酯部位

4、增加尤其顯著。
　　為考察黃連與姜黃連整體成分特征性差異，進行了黃連及姜黃連 HPLC特征圖譜研究。通過對二者 HPLC圖譜分析對比,發(fā)現(xiàn)：黃連、姜黃連有14個共有峰，標定出4個峰分別是表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿。分析發(fā)現(xiàn)，黃連炮制前后12號與13號峰面積比，13號與14號峰面積比值穩(wěn)定，差異明顯。生黃連飲片中，12號與13號峰的面積比小于1，而姜黃連則大于1；生黃連13號與14號峰的面積比值大于3而姜黃連小于3。

5、>　　為明確黃連、姜黃連優(yōu)勢抗菌譜，根據(jù)黃連主治功能，選擇了肺炎克雷伯菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為菌種。通過抗菌實驗比較，結(jié)果顯示：黃連總提取部位對銅綠假單胞菌、奇異變形桿菌、普通變形桿菌無抗菌作用，但姜黃連對這三菌種抗菌作用明顯，特別對銅綠假單胞菌有較強的抗菌效果。為分析該差異，對各提取部位進一步研究，發(fā)現(xiàn)：生黃連二氯甲烷部位對肺炎克雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌不具有抗菌作用，但姜黃連卻

6、具有明顯抗菌作用；生黃連乙酸乙酯部位對銅綠假單胞菌不具有抗菌作用，而姜黃連乙酸乙酯部位對銅綠假單胞菌抗菌作用明顯；正丁醇部位炮制前后對各菌種均有抗菌作用，姜黃連作用均強于生黃連。由此確定黃連、姜黃連抗菌譜差異以及藥效差異的關(guān)鍵提取部位。
　　在此基礎(chǔ)上，通過化學成分量效關(guān)系研究從物質(zhì)基礎(chǔ)角度詮釋黃連炮制前后抗菌作用變化機理。由于黃連與姜黃連乙酸乙酯部位抗菌譜差異明顯且與總部位一致，生品對銅綠假單胞菌無作用，而姜品作用較強，故對該部

7、位主要生物堿的含量比及抗菌作用進行量效關(guān)系研究。以純化合物模擬生黃連、姜黃連乙酸乙酯部位五種成分比，并通過比例變化和濃度變化考察抗菌作用差異。結(jié)果提示：生物堿比例變化對銅綠假單胞菌作用影響較大，其次是濃度。姜黃連乙酸乙酯部位五種生物堿：藥根堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿其比例分別是:7.69:3.35:10.00:17.59:24.42，總堿濃度是0.2484mg/ml.為抗銅綠假單胞菌最佳比例和濃度；通過統(tǒng)計學排列組合法對5種生