纖維素降解菌群的純化鑒定及其誘變育種.pdf

1、秸稈的資源化利用已成為我國(guó)的研究熱點(diǎn)，而選育高效及活性穩(wěn)定的纖維素降解菌是影響纖維素物質(zhì)應(yīng)用的關(guān)鍵。
　　 本實(shí)驗(yàn)分為三部分對(duì)纖維素降解菌進(jìn)行研究，包括纖維素降解菌的分離純化、單菌株的誘變育種以及突變菌株的培養(yǎng)條件優(yōu)化。
　　 首先，纖維素降解菌的分離純化。從實(shí)驗(yàn)室前期馴化的纖維素降解菌群5號(hào)菌群中分離篩選出4株具有降解纖維素能力的菌株，命名為F1、F2、F3和F4，通過(guò)染色實(shí)驗(yàn)以及16SrDNA鑒定，四株菌分別是蘇云金

2、芽孢桿菌、生淀粉糖化酶產(chǎn)生菌、糞產(chǎn)堿菌和蠟樣芽孢桿菌。
　　 其次，單菌株的誘變育種。本研究對(duì)分離篩選出的菌株F2進(jìn)行物理單因素誘變——紫外線誘變，以及物理化學(xué)復(fù)合因素誘變——紫外線-氯化鋰誘變。共長(zhǎng)出菌落7280個(gè)左右，其中紫外線誘變后長(zhǎng)出3510個(gè)左右，紫外線-氯化鋰誘變后長(zhǎng)出菌落3770個(gè)左右。經(jīng)革蘭氏碘液初篩共篩出154株正突變株，酶活力復(fù)篩篩出8株，通過(guò)酶活穩(wěn)定性分析，最終確定—株由紫外線-氯化鋰誘變產(chǎn)生的穩(wěn)定性較好的

3、菌株——69號(hào)菌株，其酶活力值為0.31mg/ml，為出發(fā)菌株的1.4倍。
　　 最后，突變菌株培養(yǎng)條件優(yōu)化。通過(guò)分別測(cè)定最佳氮源、碳源含量、氮源含量，以及碳源和氮源、溫度的正交試驗(yàn)，確定了本試驗(yàn)誘變菌株69號(hào)的最佳培養(yǎng)條件。優(yōu)化后的產(chǎn)酶活力達(dá)到0.081mg/mL是出發(fā)菌株的3.7倍。69號(hào)誘變株的最佳培養(yǎng)條件如下:培養(yǎng)基是Na2HPO43.0g，MgSO4·7H2O0.5g，CaCl20.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O7.5mg