纖維素分解菌的分離和鑒定

1、纖維素降解菌類的分離與鑒定系列實驗 纖維素降解菌類的分離與鑒定系列實驗一、實驗背景 一、實驗背景纖維素是植物細胞壁主要成分，屬于多糖類物質，是地球上數量最大的可再生資源。如能利用微生物將其轉化為生物產品或生物能源，即可緩解能源短缺、解決環(huán)境污染，又能形成新的產業(yè)。由于在自然界中存在著大量產纖維素酶的細菌和真菌，因而纖維素的生物降解主要依賴于微生物的作用。從 20 世紀40-50 年代起，針對產纖維素酶的微生物的分離篩選就進行了大量的工作

2、，并逐步建立起一套較完整的分離篩選方法。迄今為止有關纖維素降解菌分離篩選的研究報導已有很多，如細菌中的生孢噬纖維菌屬、噬纖維菌屬及纖維單胞菌屬等；放線菌由于能形成芽孢，與真菌相比較耐高溫和各種酸堿度，故在高溫階段放線菌對分解木質素和纖維素起著重要的作用。主要有諾卡氏菌屬、鏈霉菌屬、芽孢桿菌屬及小單胞菌屬等；真菌中研究較多的是青霉屬、根霉屬、曲霉屬等，其中以木霉屬的菌株纖維素酶活較高。以羧甲基纖維素鈉和添加少量葡萄糖作為碳源，培養(yǎng)纖維素酶

3、產生菌株，培養(yǎng)一定時間后，經剛果紅染色和稀堿液固定，在菌落周圍形成透明水解圈，根據透明圈的大小，快速定性鑒定纖維素酶產生菌酶活大小。與傳統纖維素酶活檢測方法比較，本方法菌絲生長快，兩天后菌落經染色，透明圈邊緣清晰，直觀性強，與酶活力成一定線性關系。纖維素是世界上所有植物的組成部分，是地球上最為豐富且可再生的資源。隨著世界能源形勢趨于惡化，環(huán)境問題日益加劇，利用纖維素生產有高附加值資源的以維持人類可持續(xù)發(fā)展的研究方向近年來逐步成為科學研究

4、的熱點方向。利用微生物將纖維素、半纖維素降解轉化為生物產品或生物能源即可緩解能源短缺、解決環(huán)境污染，又能形成新的產業(yè)。因此分離和篩選高酶活性的菌株是有效利用纖維素物質的關鍵。二、實驗目的 二、實驗目的從目標試樣中分離篩選出具有降解纖維素能力的菌株。三、實驗材料 三、實驗材料：1、樣品的采集1）風干土樣 E4-1、E2-6、 E2-6 試樣。2）潮濕土樣 E4-1、E2-6、 E2-6 試樣。（6）涂布平板：將稀釋度為 10-6 至 10

5、-8 懸液各取 0.08ml 涂布到平板培養(yǎng)基上，每個梯度需涂布 2 個平板，設為對照。置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察，持續(xù)觀察，直到出現明顯的菌落。3、挑菌保種將出來的明顯菌類按照類別分別保種到不同的斜面培養(yǎng)基中。4、剛果紅鑒定配制剛果紅培養(yǎng)基，將菌株點樣與剛果紅培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。觀察各個菌株是否具有分解纖維素的能力。（從濕土中提取纖維素菌） （從濕土中提取纖維素菌）1、分別配制①羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基②LB 培養(yǎng)基③高氏一號培養(yǎng)基④PD

6、A 培養(yǎng)基各 500ml，裝進 5 個瓶子中。在 14 根試管中分別加入 9ml 蒸餾水，并用試管塞塞緊。在兩個錐形瓶中分別加入 45ml 蒸餾水，并且放如玻璃球，用封口膜封好。包 90 個平板。準備 1ml 和 0.1ml 移液槍的槍頭。將以上 5 種物品用報紙包好后放入滅菌鍋中 121℃滅菌 30 分鐘。同時將操作臺的紫外線打開。2、待滅菌完后，將物品取出，放入烘箱烘干。3、將烘干后的平板、試管、錐形瓶、槍頭放入操作臺里。兩種濕土樣

7、分別稱取5g，在操作臺里加到錐形瓶中，封口，放到搖床上搖 30 分鐘。4、搖好后取回，關閉操作臺的紫外線。取 7 支試管并分別標號-2、-3、-4、-5、-6、-7，用 1ml 移液槍從一個錐形瓶中吸取 1ml 菌液，射到-2 號試管中，換槍頭，從-2 號試管中吸取 1ml 菌液射到-3 號試管中，以此類推。另一個錐形瓶的菌液也要經過同樣的操作。5、取一個培養(yǎng)基（例如 LB 培養(yǎng)基） ，倒 24 個平板，立即用 1ml 移液槍移取一種菌