軟刻蝕方法制備細胞模板及內(nèi)皮-平滑肌細胞的協(xié)同培養(yǎng).pdf

1、生物材料表面內(nèi)膜功能及完整性的恢復(fù)是解決心血管系統(tǒng)植入裝置血栓與栓塞并發(fā)癥、提高遠期的管腔通暢率的最佳方法之一。借鑒仿生表面工程的設(shè)計理念，本文采用微轉(zhuǎn)移模塑方法在NaOH活化的鈦(TiOH)表面成功制備出了透明質(zhì)酸(HA)微圖形，采用掃描電子顯微鏡(SEM)、傅里葉紅外變換光譜分析(FTIR)、接觸角測量儀、表面輪廓儀和電子能譜儀(EDX)對制備HA微圖形及其穩(wěn)定性進行了表征，進而研究了HA的抗細胞粘附功能，并利用酶聯(lián)免疫吸附實驗(E

2、lisa)和細胞粘附實驗研究了透明質(zhì)酸酶(HAa)對HA的酶解作用，以及纖維連接蛋白(FN)和IV型膠原蛋白(CollagenIV)關(guān)閉HA的抗蛋白、抗細胞粘附功能。在此基礎(chǔ)上，作為細胞模板用于研究對血小板、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞粘附的影響，以及在細胞模板上血小板/內(nèi)皮細胞、內(nèi)皮/平滑肌細胞聯(lián)合培養(yǎng)的研究。
　　 SEM、FTIR和接觸角測量結(jié)果表明：堿活化后鈦(Ti)表面形貌和粗糙度發(fā)生改變，出現(xiàn)-OH伸縮振動峰，其親水程度明顯

3、增加；SEM和表面輪廓儀檢測結(jié)果表明：采用澆鑄法制備出溝、脊分明、表面平整的PDMS彈性印章；SEM和EDX檢測結(jié)果表明：采用軟刻蝕(微轉(zhuǎn)移模塑)的方法在TiOH表面獲得了輪廓清晰的HA條紋微圖形，但HA在脊上呈不均勻的分布；XPS結(jié)果表明，涂覆HA的TiOH樣品經(jīng)過磷酸緩沖液(PBS)浸泡24h后仍能夠穩(wěn)定吸附在TiOH樣品表面，HA微圖形樣品經(jīng)過PBS浸泡后圖形結(jié)構(gòu)仍清晰可見。采用三種方法關(guān)閉HA抗蛋白、細胞粘附的功能，細胞粘附實驗

4、表明，采用HAa酶解、Collagen IV和FN組裝的方法都可以有效地關(guān)閉HA的阻抗細胞粘附功能。CCK-8結(jié)果表明這三種處理方法對平滑肌細胞的增殖能力的影響不大。采用Collagen IV組裝方法時內(nèi)皮細胞粘附率要高于其它兩種方法。
　　 單種細胞的培養(yǎng)結(jié)果表明，HA微圖形可以有效地將血小板、內(nèi)皮、平滑肌胞三種細胞限制在微圖形樣品表面的粘附區(qū)域。當(dāng)圖形脊/溝尺寸為20μ m/30μ m，與細胞大小相當(dāng)時，可以有效地引導(dǎo)內(nèi)皮細

5、胞、平滑肌細胞細胞按照圖形的方向伸長，呈有序的細胞陣列分布；HA微圖形對內(nèi)皮細胞的接觸引導(dǎo)行為的影響非常顯著，與平板樣品相比，HA微圖形表面培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞形態(tài)指數(shù)更接近體內(nèi)生理條件下的內(nèi)皮細胞的形態(tài)指數(shù)。在HA微圖形表面可以得到內(nèi)皮細胞/血小板和內(nèi)皮/平滑肌細胞有序分布的協(xié)同培養(yǎng)體系。兩種細胞的協(xié)同培養(yǎng)結(jié)果表明，血小板圖案并不能影響內(nèi)皮細胞粘附的形態(tài)，而圖案化的平滑肌細胞的更細長形態(tài)，可以調(diào)控內(nèi)皮細胞的長軸取向。但長時間的協(xié)同培養(yǎng)會引起