血管內皮和平滑肌細胞聯合培養(yǎng)構建組織工程化血管的方法初探.pdf

1、目的：探索血管內皮細胞(EC)和平滑肌細胞(SMC)聯合培養(yǎng)的方法，對其培養(yǎng)、擴增條件加以摸索，為進一步細胞植入PGA支架及血管的構建提供實驗依據。 材料與方法：無菌條件下收集山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院婦產外科和山西省人民醫(yī)院婦產外科2007年5月到2008年2月的分娩新鮮臍帶手術標本，仔細剝離臍帶動靜脈，用胰酶消化法、膠原酶消化法、胰酶和膠原酶聯合消化法、ROSS法進行內皮細胞和平滑肌細胞的聯合培養(yǎng)，用含20％胎牛血清的DME

2、M培養(yǎng)液培養(yǎng)、擴增細胞。采用倒置相差顯微鏡、免疫熒光方法、免疫組織化學方法對內皮細胞和平滑肌細胞進行鑒定。對聯合培養(yǎng)細胞進行凍存和復蘇，為進一步細胞植入PGA支架提供實驗依據。 結果：經18次嘗試后，采用胰酶消化法，倒置相差顯微鏡下觀察細胞貼壁很差，幾乎沒有細胞生長；采用膠原酶消化法18次、胰酶和膠原酶聯合消化法11次后在倒置相差顯微鏡下亦發(fā)現細胞牛長很稀少。采用ROSS法7次在倒置相差顯微鏡下5到7天觀察即可看到有細胞萌出，在

3、經過換液傳代后可以培養(yǎng)得到血管內皮和平滑肌細胞，在倒置顯微鏡顯示原代細胞及經傳代培養(yǎng)后的細胞，呈現鋪路石內皮樣細胞、梭型平滑肌樣混合生長的特征。免疫熒光化學檢測和免疫組織化學示內皮細胞Ⅷ因子、平滑肌細胞α-肌動蛋白呈陽性反應。細胞經3-5次傳代，細胞數量可增殖達到8×106～10×106。 結論：通過本次探索可以得到以下結論(1)臍帶血管內皮細胞和平滑肌細胞聯合培養(yǎng)能夠成功。 (2)胰酶消化法、膠原酶消化法、胰酶和膠原酶