ATV抑制平滑肌細(xì)胞中myocardin及下游基因的表達(dá).pdf

1、目的：Myocardin是一種能夠?qū)ζ交〖?xì)胞分化起著決定作用的細(xì)胞因子。目前研究認(rèn)為myocardin是通過與血清應(yīng)答因子(serum response factor，SRF)協(xié)同作用，從而促使平滑肌特異性基因的表達(dá)。Myocardin基因表達(dá)的升高或降低能夠引起血管平滑肌細(xì)胞的分化或去分化，最終會(huì)引起血管的病理性改變，導(dǎo)致多種心血管病的發(fā)生。氯化鉀通過激活鈣離子通道，使細(xì)胞外鈣內(nèi)流，進(jìn)而激活RhoA/ROCK通路促進(jìn)myocardi

2、n mRNA的表達(dá)。降血脂藥物阿托伐他汀(Atorvastatin，ATV)是HMG-CoA(Hydroxymethylglutaryl-CoA)還原酶抑制劑。在無明顯降低血脂的情況下，ATV對心血管具有保護(hù)作用，但目前機(jī)制尚不清楚。這種保護(hù)作用是否是由于ATV與myocardin的關(guān)系引起的也尚無定論。因此，我們擬研究ATV與myocardin的關(guān)系。
　　 方法：選取處于6-8周的C57小鼠10只，分成兩組：DMSO對照組和

3、ATV加藥組，每組5只，通過腹腔注射藥物，五天之后取其腸道、心臟、主動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈，提取RNA，采用實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Polymerase chainreaction，Real-time PCR)方法檢測myocardin的表達(dá)。細(xì)胞選用小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系(SMC)，待細(xì)胞密度達(dá)到80％左右時(shí)，將細(xì)胞用0％FBS DMEM高糖培養(yǎng)基饑餓24小時(shí)，然后用KCl，ATV，DMSO，Meva，GGPP，F(xiàn)PP處理

4、24小時(shí)，采用Real-time PCR方法和蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)(Western blot)方法分別檢測SMC中myocardin和平滑肌特異基因的mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果：在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過比較，注射ATV的小鼠的腸道、心臟、主動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈中myocardin的表達(dá)均下降。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，KCl(60mM)作為陽性對照，能夠增加小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中myocardin基因和平滑肌特異基因的表達(dá)。而ATV(1μM和1

5、0μM)可以抑制myocardin基因和平滑肌特異基因的表達(dá)，并且具有濃度依賴性。加入Meva(100μM)和GGPP(1μM)之后，可以增加由ATV抑制的myocardin基因和平滑肌特異基因的表達(dá)，而加入FPP(1μM)之后，對ATV所引起的作用沒有影響。
　　 結(jié)論：ATV可抑制小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中myocardin和平滑肌特異基因的表達(dá)，并且在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，ATV能夠抑制小鼠腸道、心臟、主動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈中myocardi