抗MICA抗體的致敏因素分析及其對腎移植的影響.pdf

1、目的和意義:隨著外科技術(shù)的進(jìn)步和新型免疫抑制藥物的出現(xiàn),腎臟移植已經(jīng)成為臨床上治療終末期腎臟疾病的最有效手段。急性排斥反應(yīng)是腎移植術(shù)后最常見的并發(fā)癥,是導(dǎo)致移植物功能喪失和長期存活失敗的重要危險(xiǎn)因素之一。排斥反應(yīng)分為細(xì)胞性排斥反應(yīng)和體液性排斥反應(yīng),其中體液性因素在腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)中起著非常重要的作用。一般認(rèn)為針對人類組織相容性抗原(Human leucocyteantigen,HLA)的抗體為主要的體液性抗體,與腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)及移

2、植腎存活率密切相關(guān),特別是移植前受者體內(nèi)針對供者的特異性抗體可以導(dǎo)致超急性排斥反應(yīng)發(fā)生。然而,即便是供受者之間HLA基因完全匹配,腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)仍可能發(fā)生。人們認(rèn)識到一些非HLA抗體也可以介導(dǎo)體液性排斥反應(yīng)。MIC基因是跨越人類組織相容復(fù)合物1(MHC-I)類2Mb長度區(qū)域的基因家族,其中只有MICA和MICB編碼、表達(dá)、轉(zhuǎn)錄。MIC基因編碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與MIIC-I類分子結(jié)構(gòu)類似,含383-389個(gè)氨基酸的多肽,包含有3個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域(

3、α1,α2,α3),α1、α2形成了抗原結(jié)合部位。MIC基因編碼的分子是與NKG2D分子相結(jié)合,不與T細(xì)胞受體(T cell rcceptor,TCR)相結(jié)合,不與β2微球蛋白相連,不與肽段結(jié)合,與抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體(transporter associated with antigen processing,TAP)無關(guān)。MICA基因具有高度多態(tài)性,目前至少發(fā)現(xiàn)61個(gè)等位基因,其多態(tài)性主要位于α2和α3結(jié)構(gòu)域。經(jīng)典的HLA-I類分子廣

4、泛分布于人體細(xì)胞,MICA基因主要表達(dá)于上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,尤其是腸道上皮細(xì)胞,也表達(dá)在大多數(shù)上皮性腫瘤細(xì)胞(胃癌、肺癌、乳腺癌、腸癌、腎癌及卵巢癌等)中,并主要與γ、δT細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞以及NK細(xì)胞上的NKG2D/DAP10受體結(jié)合,發(fā)揮細(xì)胞毒作用。MICA基因還存在明顯的種族特異性,亞洲人群中常見的MICA等位基因是MICA*002、MICA*004、MICA*008、MICA*007、MICA*010、MICA*017和MI

5、CA*049。主要組織相容性復(fù)合體I類相關(guān)鏈A抗原(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A,MICA)作為目前非HLA抗原中重要的具有高度多態(tài)性的糖蛋白抗原,是細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的多態(tài)性分子。有報(bào)道證實(shí)MICA分子是呈共顯性表達(dá),并且MICA抗原的共顯性表達(dá)對器官移植抗體所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)有重要的意義。MICA抗原可能在移植排斥中通過激活抗體介導(dǎo)或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)而

6、起作用。MICA抗原作為一個(gè)多態(tài)性抗原,能夠誘導(dǎo)移植腎患者產(chǎn)生特異性抗體。目前已經(jīng)在心、腎、胰腺移植受體內(nèi)檢測到抗MICA特異性抗體。有研究證實(shí)抗MICA抗體與移植腎急性排-斥反應(yīng)和慢性移植腎功能喪失有一定相關(guān)性。Hankey等通過免疫組化的方法檢測移植腎臟或胰腺組織中MICA基因表達(dá),在所有出現(xiàn)急性腎小管壞死(ATN)以及急性排斥反應(yīng)的患者組織中都出現(xiàn)MICA基因的表達(dá),在正常腎臟組織中沒有MICA基因的表達(dá),提示細(xì)胞表面MICA基因

7、表達(dá)物與細(xì)胞損傷之間存在關(guān)聯(lián)。然而,在沒有致敏的HLA抗體的腎移植受者中,抗MICA抗體與腎移植的關(guān)系更值得關(guān)注。本課題就抗MICA抗體在終末期腎臟病人群中的致敏因素及抗MICA抗體對腎移植術(shù)后的影響等方面展開一些探討和研究。
　　 第一部分:抗MICA抗體在終末期腎臟病患者中致敏因素分析方法
　　 選取2008年1月-2008年12月行抗MICA抗體檢測及抗MICA抗體特異性分析的98例終末期腎臟病患者。MICA熒光微

8、球由鄒義洲教授惠贈(zèng),包被10種MICA抗原,即MICA*001,MICA*002,MICA*004,MICA*007,MICA*009,MICA*012,MICA*017,MICA*018,MICA*019,MICA*027。采用液相芯片分析技術(shù),在包被已知MICA抗原的熒光微球中加入患者血清,再加入R-藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的羊抗人IgG,重懸熒光微球,Luminex機(jī)上閱讀。使用DataCollector Version1.7軟件進(jìn)行

9、數(shù)據(jù)采集,以雙色激光分別讀取每個(gè)MICA抗原>100個(gè)微球,經(jīng)分子PE熒光強(qiáng)度獲得cut-off分值,判讀出0、2、4、8,將OD值≥4定為抗MICA抗體陽性,并獲得抗MICA抗體特異性。根據(jù)抗MICA抗體是否陽性分為抗MICA抗體(+)組和抗MICA抗體(-)組,采集兩組患者年齡、性別、原發(fā)疾病、移植史、妊娠史、透析方式、輸血史、群體反應(yīng)性抗體(PRA)等資料,兩組間比較。群體反應(yīng)性抗體檢測使用美國萊姆德混合抗原板(LATM)和萊姆德

10、抗原板(LAT),采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)技術(shù),采用不同的HLA抗原包被泰薩奇板,通過與樣本血清中抗HLA-IgG抗體結(jié)合而特異性檢測出抗HLA—IgG抗體。數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,計(jì)量資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料比較采用x2檢驗(yàn)、校正x2檢驗(yàn)或Fisher確切概率檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)

11、學(xué)意義。
　　 結(jié)果:98例終末期腎臟病患者中,16例檢測到抗MICA抗體,陽性率為16.3％。檢測的抗MICA抗體分別為:抗MICA*001、002、007、012、017、018、019:抗MICA*001；抗MICA*004、009、027:抗MICA*001；抗MICA*001；抗MICA*007、027；抗MICA*019；抗MICA*001；抗MICA*019；抗MICA*019；抗MICA*019；抗MICA*00

12、4、009、019、027；抗MICA*019；抗MICA*001、019；抗MICA*002、019；抗MICA*019?？筂ICA抗體為單一特異性的有10例,抗MICA抗體為多個(gè)(≥2個(gè))有6例?？筂ICA*001出現(xiàn)頻率為20％,抗MICA*002、004、007、009均為7％,抗MICA*012、017、018均為3％,抗MICA*019為33％,抗MICA*027為10％。常見為抗MICA*019、001?？筂ICA抗體(+

13、)組和抗MICA抗體(-)組間,輸血史(50％vs17％,P=0.010)、移植史(38％vs11％,P=0.021)、PRA(38％vs13％,P=0.049)、妊娠史(55％vs19％,P=0.036)等因素差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中2例抗MICA抗體陽性患者未發(fā)現(xiàn)輸血、妊娠、移植等病史。
　　 第二部分:抗MICA抗體對腎移植影響的相關(guān)性研究方法
　　 移植前行抗MICA抗體檢測并在我院行同種異體腎移植

14、手術(shù)的終末期腎病患者,共38例,根據(jù)抗MICA抗體是否陽性分為抗MICA抗體(+)組和抗MICA抗體(-)組?？筂ICA抗體檢測采用液相芯片分析技術(shù),在包被已知MICA抗原的熒光微球中加入患者血清,再加入R-藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的羊抗人IgG,重懸熒光微球,Luminex機(jī)上閱讀。使用Data Collector Version1.7軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,以雙色激光分別讀取每個(gè)MICA抗原>100個(gè)微球,經(jīng)分子PE熒光強(qiáng)度獲得cut-off

15、分值,判讀出0、2、4、8,將OD值≥14定為抗MICA抗體陽性,并獲得抗MICA抗體特異性。采集38例移植受者年齡、性別、移植次數(shù)、供受者間HLA抗原錯(cuò)配數(shù)、供腎冷缺血時(shí)間、術(shù)后免疫抑制方案、移植前后抗MICA抗體變化、急性排斥反應(yīng)(AR)發(fā)生率,移植腎功能恢復(fù)時(shí)間及移植腎存活率等資料,兩組間比較。AR抗排斥治療方案:給予甲基強(qiáng)的松龍(MP)沖擊治療,劑量為0.5 g、0.25 g、0.25 g,連續(xù)3 d。如果腎功能無明顯好轉(zhuǎn)或繼續(xù)

16、惡化,使用抗CD3單克隆抗體(OKT3)治療,療程3-5 d。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行,計(jì)量資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料比較采用x2檢驗(yàn)、校正x2檢驗(yàn)或Fisher確切概率檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:38例腎移植受者中,抗MICA抗體(+)組有10例,抗MICA抗體(-)組有28例,均為尸體供腎,供受者ABO血型相同,術(shù)前淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)陰性?；颊咝g(shù)后免疫抑制方案均為

17、:抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)+他克莫司(Tacrolimus,Tac)+霉酚酸酯(Mycophenolate,MMF)+強(qiáng)的松(Prednisone,Pred)。移植受者兩組間年齡、性別、移植次數(shù)、冷熱缺血時(shí)間、供受者間HLA-A/B/DR錯(cuò)配數(shù)等因素差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腎移植受者的AR發(fā)生率為15.8％(6/38),經(jīng)甲基強(qiáng)的松龍(MP)沖擊治療后均成功逆轉(zhuǎn)。其中抗MICA抗體(+)組4例發(fā)生AR；抗MICA抗體(-)組

18、2例發(fā)生AR,兩組間急性排斥反應(yīng)發(fā)生率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(40％vs7％,P=0.031)。給予記錄尿量、血壓,監(jiān)測肝、腎功能,血、尿常規(guī)及FK506血藥濃度,調(diào)整抗排斥藥物劑量,行營養(yǎng)支持及應(yīng)用抗生素防治感染,無尿或尿量<1500mL/d時(shí),行無肝素或低分子肝素血液透析過渡治療,所有患者移植腎功能均逐步恢復(fù)正常。其中抗MICA抗體(+)組移植腎功能恢復(fù)時(shí)間平均為14.6±4.7d,抗MICA抗體(-)組移植腎功能恢復(fù)時(shí)間平均為8.2±4

19、.5d,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。隨訪10-24個(gè)月,抗MICA抗體(-)組1例病人因未規(guī)律口服抗排斥藥物引起血肌酐進(jìn)行性升高,行移植腎切除并血液透析維持治療；1例病人因移植腎動(dòng)脈扭轉(zhuǎn),移植腎周血腫行移植腎切除?？筂ICA抗體(+)組患者隨訪期間移植腎功能良好,無特殊并發(fā)癥發(fā)生。兩組移植腎存活率分別為93％、100％。抗MICA抗體手術(shù)前后變化的有:1例患者術(shù)前抗MICA抗體陰性,術(shù)后17d檢測到抗MICA*007、027

20、:1例患者術(shù)前為抗MICA*001、002、007、012、017、018、019,術(shù)后25d為抗MICA*001、002、007、012、017、018、019、027;1例患者術(shù)前為抗MICA抗體陰性,術(shù)后14d檢測到抗MICA*001；1例患者術(shù)前為抗MICA*004、009、027,術(shù)后第5d發(fā)生AR,給予甲基強(qiáng)的松龍(MP)沖擊治療,第8d、30d檢測抗MICA抗體陰性,移植腎功能于第20d逐漸好轉(zhuǎn),出院時(shí)血肌酐水平163um

21、ol/L,隨訪兩年期間血肌酐水平波動(dòng)在76-136umol/L。
　　 結(jié)論:對于終末期腎臟病患者,輸血、妊娠、移植等因素可以引起抗MICA抗體產(chǎn)生。抗HLA抗體和抗MICA抗體生成有一定關(guān)聯(lián)性。部分抗MICA抗體為自身反應(yīng)性抗體,可能通過發(fā)熱、病毒感染、炎癥、DNA損傷等誘導(dǎo)表達(dá)。抗MICA抗體可與移植腎內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的多態(tài)性MICA抗原作用引起移植腎損傷,與移植腎急性排斥反應(yīng)及移植腎功能延遲恢復(fù)相關(guān)。動(dòng)態(tài)監(jiān)測抗MICA抗體有