牛支原體肺炎病原的鑒定、診斷和疫苗的初步研究.pdf

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文牛支原體肺炎病原的鑒定、診斷和疫苗的初步研究PreliminaryResearehontheIdentifieationofthePathogen，DiagnosisandVaecineonMJ夕eoplasmabovisPneumonia授授授教教教教教教研究生:石磊指導(dǎo)教師:郭愛(ài)珍指導(dǎo)小組:陳煥春金梅林周銳何啟蓋吳斌方六榮專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:動(dòng)物病原分子生物學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:2

2、010年6月23日華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二O一O年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2010屆碩士研究生學(xué)位論文2.3.1.4實(shí)驗(yàn)牛支原體與細(xì)菌L型的鑒定.........................................……222.3.2牛支原體臨床分離株藥敏實(shí)驗(yàn)........................................................……222.3.3其它常規(guī)細(xì)菌的分離培養(yǎng).............

3、.....................................................……242.3.4泰勒蟲(chóng)檢測(cè)...........……，........................................................................……242.4討論..........................................................

4、......................................................................……25第3章牛支原體特異性檢測(cè)方法的建立..............................................................……273.1材料與方法.......................................................

5、...........................................................……273.1.1試劑和材料..........................................................................................……273.1.1.1細(xì)菌菌株..........................................

6、..........................................……273.1.1.2載體與質(zhì)粒................................................................................……283.1.1.3主要試劑...................................................................

7、.................……283.1.1.4培養(yǎng)基與抗生素配制.................................................................……293.1.1.5主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制............................................……293.2實(shí)驗(yàn)方法......................................

8、.................................................................................……313.2.1GAPDH基因的擴(kuò)增............................................................................……313.2.1.1PCR擴(kuò)增目的基因........................

9、............................................……313.2.1.2PCR產(chǎn)物回收與純化.......……，二，...............................................……323.2.1.3重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建................................................................……323.2.1.4大

10、腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備(CaCI:法)...................................……333.2.1.5熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞..……、…，..…，..............……333.2.1.6質(zhì)粒的少量制備(堿裂解法)................................................……333.2.1.7重組質(zhì)粒的酶切鑒定.....................

11、...........................................……343.2.2GAPDH的定點(diǎn)突變(PCR一sitedireetmutation，SDM)................……343.2.3GAPDH蛋白的表達(dá)與純化與鑒定....................................................……353.2.3.1原核誘導(dǎo)表達(dá)的突變重組質(zhì)粒.............

12、..........................................……353.2.3.2原核誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化............................................................……353.2.3.3SDS一PAGE電泳........................................................................……36

13、3.2.3.4大量誘導(dǎo)表達(dá)與蛋白純化........................................................……363.2.4W己stern一blotassay..............……，............................................................……373.2.5GAPDH蛋白作為包被蛋白的間接ELISA檢測(cè)方法的建立......

14、.....……373.2.5.1反應(yīng)條件的優(yōu)化..........................................……，........................……373.2.5.2臨床樣本檢測(cè).............................................……，.................……，……383.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果................................

15、.......................................................................................……383.3.1GAPDH基因的擴(kuò)增............................................................................……383.3.2GAPDH的定點(diǎn)突變(PCR一sitedireetmuta