乳酸桿菌對細胞因子及TLR-NF-κB途徑的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、乳酸菌作為益生菌，可以通過對抗炎因子和促炎因子的調(diào)節(jié)發(fā)揮抗腸炎作用，研究表明，不同乳酸菌對不同細胞因子的調(diào)節(jié)作用存在種屬性差異。近幾年，乳酸桿菌對致病菌S. sonnei刺激HT-29細胞產(chǎn)生細胞因子的調(diào)節(jié)作用及其作用機制的研究較少，所以本實驗以S. sonnei作為炎癥刺激，研究乳酸桿菌與 HT-29細胞中 TLR-NF-κB信號途徑的相關(guān)性。采用ELISA法研究副干酪乳桿菌副干酪亞種M5、干酪乳桿菌Q8和鼠李糖乳桿菌J10對HT-2

2、9產(chǎn)生的多種細胞因子白介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和IL-12等的調(diào)節(jié)作用。采用免疫熒光技術(shù)和流式細胞術(shù)研究了三種乳酸桿菌M5-L、Q8-L和J10-L對HT-29細胞中TLR-NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)作用。
　　實驗結(jié)果顯示，只加 S. sonnei的陽性對照組中，IL-1β分泌量為156.3 pg/mL，而 M5-L、Q8-L和J10-L的預(yù)防組中，IL-1β的分泌量分別為118.9 pg/m

3、L、80.0 pg/mL和104.9 pg/mL，說明三種乳酸桿菌對炎性因子IL-1β均有顯著的抑制。IL-8的分泌量在只加 S. sonnei的陽性對照組中，為1096.0 pg/mL，而M5-L、Q8-L和J10-L的預(yù)防組中，IL-8的分泌量分別為112.7 pg/mL、290.9 pg/mL和213.0 pg/mL，說明三種乳酸桿菌對炎性因子IL-8的分泌均也有顯著的抑制。對TNF-α的檢測結(jié)果顯示，三種乳酸桿菌可以促進HT-2

4、9細胞中TNF-α的分泌，但分泌量較少。對IL-10的檢測結(jié)果顯示，M5-L和J10-L能顯著促進抗炎因子 IL-10的分泌。對炎性因子 IL-6和IL-12的檢測發(fā)現(xiàn)，HT-29細胞本身不能產(chǎn)生IL-6和IL-12，且S. sonnei也不能刺激HT-29細胞產(chǎn)生這兩種炎性因子。用熒光定量PCR法，對IL-8的mRNA進行檢測，結(jié)果顯示M5-L、Q8-L和J10-L均能顯著降低 IL-8的mRNA表達，表明三種乳酸桿菌不僅能抑制炎性因

5、子IL-8的分泌，而且也能抑制其 mRNA表達。
　　免疫熒光技術(shù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，致病菌S. sonnei能促進NF-κB發(fā)生核轉(zhuǎn)位，從而促進炎性因子 IL-8的產(chǎn)生，三種乳酸桿菌對 NF-κB的核轉(zhuǎn)位有一定的抑制作用，但不能完全抑制。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果表明，致病菌S. sonnei能刺激誘導(dǎo)HT-29細胞上TLR4表達的提高，三種乳酸桿菌均能抑制S. sonnei刺激導(dǎo)致的HT-29細胞上 TLR4表達的提高，從而抑制 TLR4介