2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  宮頸癌現(xiàn)階段的治療方法主要包括手術(shù)、放化療,手術(shù)往往會(huì)使女性失去生育能力。放化療也給患者帶來巨大的生理、心理痛苦?,F(xiàn)在隨著對(duì)宮頸癌、癌前病變的認(rèn)識(shí)加深,發(fā)現(xiàn)自身免疫在疾病的發(fā)生、發(fā)展或疾病的逆轉(zhuǎn)、轉(zhuǎn)歸乃至自愈過程中發(fā)揮著重要作用。
  乳酸桿菌是存在于人和動(dòng)物口腔、消化道、陰道的正常菌群。在臨床上,乳酸桿菌主要用于增強(qiáng)患者的免疫力。現(xiàn)今關(guān)于陰道菌群與HPV感染、宮頸癌前病變、宮頸癌的發(fā)生之間的研究越來越多。有研究

2、顯示乳酸桿菌可以抑制宮頸癌增殖。本研究亦發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌能很好的抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。
  癌細(xì)胞的無限增殖是腫瘤發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ),Cyclin作為控制細(xì)胞增殖、凋亡的原癌基因受到了廣泛關(guān)注,乳酸桿菌可以抑制宮頸癌細(xì)胞的生長,但是乳酸菌抑制宮頸癌細(xì)胞生長、增殖的機(jī)制尚不明確。
  本研究旨在探求乳酸桿菌抑制宮頸癌細(xì)胞增殖的可能機(jī)制,為以后乳酸桿菌預(yù)防與治療宮頸癌提供理論依據(jù),并力圖探索宮頸癌治療的可能靶點(diǎn)。
  方法:

3、
  基于前期實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌與Hela細(xì)胞MOI為1000:1的狀態(tài)下,作用效果最佳,本次實(shí)驗(yàn)乳酸桿菌與Hela細(xì)胞MOI均為1000:1。
  1乳酸桿菌對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖作用
  1.1增殖實(shí)驗(yàn)
  乳酸桿菌作用Hela細(xì)胞0h、12h、24h、36h、48h、60h、72h,MTS細(xì)胞增殖試劑盒檢測乳酸桿菌對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響。
  1.2乳酸桿菌抑制Hela細(xì)胞增殖的可能機(jī)制研究

4、>  乳酸桿菌直接作用于Hela細(xì)胞,以3×105/孔鋪于6孔板中,置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱過夜。乳酸桿菌以MOI1000:1作用于細(xì)胞。對(duì)照組加入2ml無雙抗DMEM高糖培養(yǎng)基,培養(yǎng)12h、24h、36h、48h、60h、72h后,收集細(xì)胞備用。
  1.2.1實(shí)時(shí)定量PCR檢測乳酸桿菌作用后Dvl-1、Dvl-2、Dvl-3、GSK3β、CSL、NLK、CyclinD1 mRNA水平變化。
  1.2.2 Wester

5、n blot檢測乳酸桿菌作用后不同時(shí)間點(diǎn)β-catenin、GSK3β、CSL、NLK、CyclinD1的蛋白水平變化。
  2行SiRNA干擾Hela細(xì)胞NLK的基因表達(dá)后,乳酸桿菌對(duì)Hela細(xì)胞增殖作用的影響。
  2.1實(shí)時(shí)定量PCR檢測SiRNA干擾效果
  2.2增殖實(shí)驗(yàn)
  設(shè)置空白對(duì)照組、陰性干擾組、干擾組,SiRNA作用24h后,加入乳酸桿菌作用0h、12h、24h、36h、48h、60h,MTS

6、細(xì)胞增殖試劑盒檢測乳酸桿菌對(duì)干擾NLK基因表達(dá)后的Hela細(xì)胞增殖的影響。
  2.3實(shí)時(shí)定量PCR檢測SiRNA干擾Hela細(xì)胞后,乳酸桿菌作用48h NLK、CyclinD1核酸水平變化,Western blot檢測NLK、CyclinD1蛋白水平變化。
  3統(tǒng)計(jì)方法
  用SPSS(21.0版)統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)分析,對(duì)于符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差描述,兩樣本間行t檢驗(yàn)或t'檢驗(yàn),多樣本分析運(yùn)用方差分析;非

7、正態(tài)數(shù)據(jù)用秩和檢驗(yàn),對(duì)于率、比的比較行卡方檢驗(yàn)。
  結(jié)果:
  1乳酸桿菌作用Hela細(xì)胞后,顯微鏡下顯示隨著作用時(shí)間延長,Hela細(xì)胞生長速度減慢,細(xì)胞碎片隨時(shí)間增加明顯增多,MTS結(jié)果顯示乳酸桿菌作用36小時(shí)后,細(xì)胞增殖明顯減弱,乳酸桿菌作用組與空白組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.793,P=0.000145)。
  2乳酸桿菌作用Hela細(xì)胞后,Wnt通路中的接頭蛋白Dvl的三個(gè)亞基(Dvl-1、Dvl-

8、2、Dvl-3)mRNA水平表達(dá)趨勢一致,表現(xiàn)為菌作用后其表達(dá)量迅速增加,24小時(shí)后,表達(dá)逐漸減少,提示乳酸桿菌作用后,可能激活了Wnt通路。GSK3βmRNA水平整體呈上升趨勢,與空白對(duì)照組相比,具有顯著差異(F=25.549,P=0.000);然而GSK3β蛋白表達(dá)量明顯降低(F=34.151,P=0.000),呈時(shí)間依賴性;原因可能是活化的Dvl蛋白能抑制GSK-3β的活性。與其結(jié)合的靶蛋白β-catenin在乳酸桿菌作用細(xì)胞后,

9、與空白對(duì)照組相比,表達(dá)量顯著升高,但不同作用時(shí)間組之間無顯著差異。然而其下游的CyclinD1無論是mRNA水平還是蛋白水平呈現(xiàn)穩(wěn)定的下降趨勢,與空白對(duì)照組相比,差異具有顯著性。提示乳酸桿菌并非通過激活經(jīng)典Wnt通路發(fā)揮抑制Hela細(xì)胞增殖作用。
  3乳酸桿菌作用Hela細(xì)胞后,Notch通路中的關(guān)鍵接頭分子CSL無論從mRNA水平還是蛋白水平的表達(dá)量與空白對(duì)照組相比均顯著增加;而受其抑制的下游的CyclinD1無論是mRNA水

10、平還是蛋白水平呈現(xiàn)穩(wěn)定的下降趨勢,與空白對(duì)照組相比,差異具有顯著性。提示Notch通路中的接頭分子CSL可能在乳酸桿菌抑制Hela細(xì)胞增殖作用中發(fā)揮作用。
  4 BMP通路中的關(guān)鍵分子NLK則在乳酸桿菌作用細(xì)胞后,其mRNA水平表達(dá)不穩(wěn)定,但NLK的蛋白表達(dá)隨作用時(shí)間顯著增多(F=20.703, P=0.000),而受其抑制的下游的CyclinD1無論是mRNA水平還是蛋白水平呈現(xiàn)穩(wěn)定的下降趨勢,與空白對(duì)照組相比,差異具有顯著性

11、。
  5 SiNLK干擾Hela細(xì)胞中NLK表達(dá)后,NLK抑制率達(dá)80%。
  6 SiNLK干擾NLK表達(dá)后,SiNLK干擾組Hela細(xì)胞生長狀態(tài)優(yōu)于空白對(duì)照組、陰性干擾組,MTS結(jié)果顯示SiNLK干擾組細(xì)胞增殖優(yōu)于空白對(duì)照、陰性干擾組。乳酸桿菌加入后,干擾組細(xì)胞生長狀態(tài)仍優(yōu)于空白對(duì)照組、陰性干擾組。MTS結(jié)果顯示SiNLK干擾組的細(xì)胞增殖明顯優(yōu)于空白對(duì)照組、陰性干擾組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  7 Hela細(xì)胞中

12、NLK表達(dá)被干擾后,乳酸桿菌再作用細(xì)胞48h,CyclinD1無論mRNA水平或蛋白水平的表達(dá)量都較干擾前或陰性干擾組明顯升高??瞻讓?duì)照組與陰性干擾組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.091)。提示BMP通路中的NLK在乳酸桿菌抑制Hela細(xì)胞增殖發(fā)揮重要作用。
  結(jié)論:
  1乳酸桿菌可以抑制Hela細(xì)胞增殖、生長。
  2乳酸桿菌作用Hela細(xì)胞后CyclinD1表達(dá)顯著降低。
  3乳酸桿菌并非通過Wnt經(jīng)典途徑抑

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