2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、蜂王漿具有許多益于人類健康的生物學(xué)功能,蜂王漿主蛋白(MRJPs)作為蜂王漿中含量最多的特征性成分,已經(jīng)成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)。因此本課題以西方蜜蜂(Apis mellifera)蜂王漿為原料,建立一套逐步分離純化天然狀態(tài)下MRJP1-3的流程,并首次利用高靈敏度的高效液相對(duì)分離純化后的單一蛋白進(jìn)行純度鑒定,同時(shí)研究了蜂王漿蛋白在儲(chǔ)存過(guò)程中的變化,結(jié)果如下。
  1.使用疏水色譜柱、尺寸排阻色譜柱和陽(yáng)離子交換色譜柱三種色譜柱,建立了一

2、套MRJP1-3的純化流程。首先使用Hitrap Butyl-HP疏水色譜柱對(duì)蜂王漿粗提液進(jìn)行分離,得到含有MRJP2和MRJP3的穿透組分,和依次被洗脫的MRJP1寡聚體組分和MRJP1單體組分;然后對(duì)兩個(gè)MRJP1組分分別使用HiLoad X16/60 Superdex200 pg尺寸排阻色譜柱進(jìn)行純化,得到了MRJP1寡聚體1、MRJP1寡聚體2和MPJP1單體;最后使用Toyopearl GigaCap S-650M陽(yáng)離子交換色

3、譜柱對(duì)來(lái)自第一步疏水色譜層析的穿透組分進(jìn)行分離,得到了MRJP2和MRJP3。
  2.通過(guò)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)對(duì)五個(gè)純化好的單一主蛋白進(jìn)行鑒定,其中MRJP1寡聚體1、MRJP1寡聚體2、MRJP1單體、MRJP2和MRS3的序列覆蓋率分別為:92.13%、76.62%、91.2%、87.39%和64.71%。其中670 kDa蛋白首次被純化并鑒定為MRJP1寡聚體。使用SEC-HPLC對(duì)這五個(gè)單一蛋白

4、進(jìn)行了純度鑒定,結(jié)果分別為89.88%、67.79%、99.92%、99.41%和99.97%。
  3.利用分析超速離心方法,對(duì)MRJP1寡聚體進(jìn)行精確的分子量測(cè)定,結(jié)果表明MRJP1含有三個(gè)寡聚體,分別是228 kDa的MRJP1寡聚體1、408 kDa的MRJP1寡聚體2和639 kDa的MRJP1寡聚體3,均由MRJP1單體和Apisimin組成。我們推測(cè)MRJP1寡聚體2和3分別為MRJP1寡聚體1的二倍體和三倍體。根據(jù)

5、中低壓尺寸排阻色譜,Native-PAGE電泳和質(zhì)譜結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)MRJP1是蜂王漿中含量最多的蛋白,在天然狀態(tài)下MRJP1在蜂王漿中主要以寡聚體形式存在,228 kDa的MRJP1寡聚體1的含量最多,MRJP1單體的含量很少。
  4.利用同步輻射真空紫外圓二色譜技術(shù)對(duì)五個(gè)單一主蛋白在25℃下進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定,結(jié)果表明天然狀態(tài)下,MRJP1-3主要以β折疊和無(wú)規(guī)則卷曲組成,α螺旋很少。
  5.結(jié)合電泳分析、蛋白酶解法、茚

6、三酮法、全自動(dòng)氨基酸分析等技術(shù),確定了蜂王漿蛋白在SEC-HPLC上的9個(gè)色譜峰,即峰1主要為MRJP1寡聚體2,峰2主要為MRJP1寡聚體1,峰3主要為MRJP3,峰4主要為MRJP2和少量的MRJP1單體,峰5-9為一些游離氨基酸和小肽。
  6.使用高效液相尺寸排阻色譜(SEC-HPLC)分析在不同儲(chǔ)存條件下蜂王漿蛋白的變化,結(jié)果表明:新鮮蜂王漿在冷凍(-18℃)儲(chǔ)存6個(gè)月內(nèi)蛋白成分基本無(wú)變化;在4℃下儲(chǔ)存1個(gè)月后,蛋白成分

7、出現(xiàn)緩慢變化;在室溫下儲(chǔ)存一個(gè)月內(nèi),就會(huì)出現(xiàn)較為明顯的成分變化。在室溫和4℃條件下隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng),670 kDa、290 kDa MRJP1寡聚體和MRJP1單體呈現(xiàn)下降趨勢(shì),而新出現(xiàn)的700 kDa和440 kDa寡聚體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。另外,通過(guò)SEC-HPLC檢測(cè)蜂王漿蛋白,發(fā)現(xiàn)當(dāng)蜂王漿中主蛋白峰1面積比小于0.50,峰2面積比大于0.55,峰N面積比小于0.02時(shí),可以認(rèn)為蜂王漿是新鮮的。因此我們建立了一個(gè)基于SEC-HPLC檢

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