家蠶后部絲腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人血清白蛋白和蜂王漿主蛋白1的研究.pdf

1、家蠶絲腺具有高效合成分泌蛋白的能力，并且絲腺內(nèi)蛋白能夠隨著吐絲行為進(jìn)入繭層，是一種理想的生物反應(yīng)器。
　　人血清白蛋白(Human serum albumin，HSA)占血漿蛋白50％以上，是維持血液滲透壓的重要組成部分，而且還具有運(yùn)輸功能，是重要的生物學(xué)制劑。本研究將piggyBac轉(zhuǎn)座酶或TALE-piggyBac融合轉(zhuǎn)座酶分別與人血清白蛋白表達(dá)質(zhì)粒pBHSA共同注射到蠶卵內(nèi)，經(jīng)熒光篩選和目的基因PCR擴(kuò)增鑒定證實(shí)，成功獲得了

2、77個(gè)穩(wěn)定遺傳和表達(dá)分泌人血清白蛋白轉(zhuǎn)基因家蠶家系。通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)，篩選到HSA mRNA表達(dá)量較高的轉(zhuǎn)基因家蠶家系A(chǔ)2。用磷酸鹽緩沖液(Phosphate buffer saline，PBS)提取繭層可溶性蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western blot證實(shí)轉(zhuǎn)基因家蠶繭層中含有人血清白蛋白?；叶确治鲲@示，轉(zhuǎn)基因家蠶家系A(chǔ)2的繭層中人血清白蛋白占總可溶蛋白的29.1％，占繭層重的1.74％。
　　蜂王漿主蛋白1（Ma

3、jor royal jolly protein1，MRJP1）具有抗腫瘤和降血壓等多種生物學(xué)功能，還是決定蜜蜂級(jí)型分化的關(guān)鍵因子。本研究將TALE-piggyBac融合轉(zhuǎn)座酶與中華蜜蜂蜂王漿主蛋白1表達(dá)質(zhì)粒pBMRJP1共同注射到蠶卵內(nèi)，經(jīng)熒光篩選和目的基因PCR擴(kuò)增鑒定證實(shí)，成功獲得3個(gè)穩(wěn)定遺傳和表達(dá)分泌中蜂MRJP1轉(zhuǎn)基因家蠶家系。通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)，篩選到MRJP1 mRNA表達(dá)量較高的轉(zhuǎn)基因家蠶家系Q4。用PBS提取繭層蛋白