高精料日糧對反芻動物乳腺組織細胞凋亡的影響以及日糧中添加丁酸鈉的調節(jié)作用.pdf

1、在現代奶業(yè)生產中，為了提高奶產量，同時滿足泌乳早期和中期不斷增加的能量需求，常給奶?；蚰躺窖蝻曃垢呔?，這種飼喂方式會引起瘤胃異常發(fā)酵，進而引起亞急性瘤胃酸中毒。瘤胃內LPS蓄積并透過胃腸道到達全身循環(huán)系統(tǒng)包括乳腺，LPS可激活NF-κB信號通路，之后調節(jié)細胞凋亡。丁酸鈉有促進胃腸道組織發(fā)育和增強其屏障功能的作用，本試驗以泌乳中期荷斯坦奶牛和薩能奶山羊為試驗對象，探究高精料日糧對反芻動物乳腺組織細胞凋亡的影響以及日糧中添加丁酸鈉的作用。

2、
　　試驗一:高精料日糧對奶牛乳腺組織細胞凋亡的影響:本試驗以12頭泌乳中期的荷斯坦奶牛為試驗對象，隨機分為兩組，每組6只。其中一組飼喂低精料日糧，即日糧中含有40％的精料和60％的粗料，精粗比為4∶6，稱為LC組（Low Concentrate），作為對照組;另外一組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，稱為HC組（High Concentrate），作為試驗組。試驗周期為18周，試驗開始前為所有奶牛安裝瘤胃瘺管，試驗后期采集瘤胃液、

3、奶、乳動脈血、乳靜脈血和乳腺組織細胞樣品，測定瘤胃液pH值、奶產量和乳成分、瘤胃液和血漿中LPS含量、乳腺組織細胞中凋亡相關基因如caspase-3、caspase-8和caspase-9等的表達以及凋亡相關蛋白酶的活性和通路中NF-κB的蛋白表達。結果顯示:長期高精料飼喂使奶牛瘤胃pH值均值降低，pH值低于5.6的時間超過3 h;和低精料組相比，高精料組的奶產量和乳脂率和乳脂含量都極顯著下降（P＜0.01），乳蛋白率卻顯著提高（P＜0

4、.05）;高精料組瘤胃液和血漿中LPS含量都顯著高于低精料組(P＜0.01);高精料組caspase-3的基因表達顯著高于低精料組(P＜0.05)而bcl-2的基因表達顯著低于低精料組(P＜0.05);高精料組caspase-3和caspase-8的酶活性相比于低精料組都顯著升高(P＜0.01);高精料組NF-κB p65和磷酸化的NF-κBp65的蛋白表達量都顯著高于低精料組(P＜0.05)。結論是長期飼喂高精料誘發(fā)了奶牛乳腺組織細胞

5、的凋亡。
　　試驗二:高精料日糧對奶山羊乳腺組織細胞凋亡的影響以及日糧中添加丁酸鈉的調節(jié)作用:本試驗采用18頭泌乳中期的薩能奶山羊，隨機分為三組，每組6只。三組的飼喂方案如下:第一組飼喂低精料日糧，即日糧中含有40％的精料和60％的粗料，精粗比為4∶6，稱為LC組（Low Concentrate）;第二組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，稱為HC組（High Concentrate）;第三組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，并且在日糧

6、中添加丁酸鈉（Sodium Butyrate）一同飼喂，稱為BHC組。試驗周期為20周，試驗開始前為所有奶山羊安裝瘤胃瘺管和肝臟肝靜脈血管插管，試驗后期采集瘤胃液、奶、肝靜脈血和乳腺組織細胞樣品，測定瘤胃液pH值、奶產量和乳成分、血漿中LPS和促炎性因子含量、乳腺組織細胞中凋亡相關基因如caspase-3、caspase-8、caspase-9、bcl-2和bax等的表達以及凋亡相關蛋白酶的活性。結果顯示:高精料日糧引起了瘤胃pH的下降

7、，添加丁酸鈉后瘤胃pH值有一定回升;HC組外周血中LPS的含量顯著高于LC組和BHC組(P＜0.01);HC組外周血中主要炎性因子IL-1β，IL-6，TNF-α的含量都顯著高于LC組和BHC組(P＜0.05); HC組caspase-3基因的表達和蛋白酶活性都顯著高于LC組和BHC組(P＜0.01)。結論是高精料日糧引起了奶山羊乳腺細胞凋亡，日糧中添加丁酸鈉一定程度上緩解了凋亡情況。
　　試驗三:高精料日糧對奶山羊乳腺組織細胞凋

8、亡信號通路中相關蛋白表達的影響以及日糧中添加丁酸鈉的調節(jié)作用:采用18頭泌乳中期的薩能奶山羊，隨機分為三組，每組6只。三組的飼喂方案如下:第一組飼喂低精料日糧，即日糧中含有40％的精料和60％的粗料，精粗比為4∶6，稱為LC組（Low Concentrate）;第二組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，稱為HC組（High Concentrate）;第三組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，并且在日糧中添加丁酸鈉（Sodium Butyrate

9、）一同飼喂，稱為BHC組。試驗周期為20周，試驗后期采集乳腺組織細胞樣品。用western blot方法檢測通路中相關蛋白如NF-κB、bax、bcl-2、cytochrome C和caspase-3原型和激活型的表達。結果顯示:HC組奶山羊乳腺組織細胞中p65的蛋白表達量顯著高于LC組和BHC組，并且和LC組相比，BHC組的p65蛋白表達量顯著下調;對于磷酸化的p65，HC組含量顯著高于LC組和BHC組;BHC組bax的蛋白表達量顯著

10、低于LC組和HC組;BHC組的bcl-2蛋白表達量顯著高于LC組和HC組;HC組cytochromeC的蛋白含量顯著高于LC組和BHC組;對于caspase-3原型，HC組表達量顯著高于LC組和BHC組，但是LC組和BHC組之間并無顯著差異;對于激活型的caspase-3，BHC組表達量顯著低于LC組和HC組。結論是高精料飼喂引起了奶山羊乳腺組織細胞p65和磷酸化的p65表達量的升高，并引起了促凋亡相關蛋白如bax、cytochrome