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文檔簡(jiǎn)介
1、共軛亞油酸以其諸多有益于消費(fèi)者健康的作用而倍受關(guān)注,本試驗(yàn)以山羊?yàn)樵囼?yàn)?zāi)P停芯苛烁呔先占Z對(duì)山羊瘤胃中脂肪酸生物氫化作用的影響,采用消化道瘺管技術(shù),慢性多血管瘺技術(shù)和分子生物學(xué)方法,研究高精料日糧條件下共軛亞油酸前體物反-11油酸在山羊瘤胃內(nèi)生成,消化道吸收,肝臟中代謝和共軛亞油酸在組織和乳脂中的合成狀況,組織中順-9,反-11共軛亞油酸合成的關(guān)鍵酶硬脂酰輔酶A脫氫酶的基因表達(dá)水平,揭示高精料日糧對(duì)反芻動(dòng)物體內(nèi)共軛亞油酸形成的影響及其
2、機(jī)理。1.高精料日糧對(duì)瘤胃消化代謝的影響體外試驗(yàn)
采集8只本地泌乳期山羊的瘤胃液作為供體,分別與高、低精粗比日糧在體外發(fā)酵設(shè)備中孵育,研究在體外試驗(yàn)條件下,高低精料在瘤胃液中的微生物作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物之間的差異。在0、1、4和6h的孵育時(shí)間內(nèi),動(dòng)態(tài)采集瘤胃液,用于分析液pH值、瘤胃液中氨氮、微生物粗蛋白、揮發(fā)性脂肪酸和長(zhǎng)鏈脂肪酸的濃度。高低精料在體外試驗(yàn)中產(chǎn)生的酸性物質(zhì)導(dǎo)致的pH下降差異不顯著,在6h的時(shí)間跨度里,pH值未低
3、過6.2,高精料組產(chǎn)生的氨氮濃度顯著高于低精料組的,但高低精料組之間微生物粗蛋白的濃度差異不顯著,乙酸、丙酸以及丁酸在發(fā)酵2h時(shí)出現(xiàn)差異,而隨后兩組間的乙酸、丙酸以及丁酸無差異。高精料組的硬脂酸(C18∶0)以及順-6油酸含量顯著高于低精料組,高精料組反-11油酸的含量顯著低于低精料組,其余測(cè)出的組分未見顯著差異。結(jié)果表明,高精料日糧在體外發(fā)酵中產(chǎn)生更多的氨氮,而并沒有能夠充分用于微生物蛋白的合成,能源的利用可能不充分,且高精料日糧產(chǎn)生
4、的反-11油酸較少,不利于順9,反-11共軛亞油酸形成。
2.高精料日糧對(duì)山羊瘤胃內(nèi)脂肪酸生物氫化作用的影響
8只本地泌乳期山羊隨機(jī)分為兩組,分別飼喂高精料和低精料,觀察山羊在高精料條件下是否發(fā)生亞急性瘤胃酸中毒,以及高精料日糧影響下的瘤胃發(fā)酵類型以及發(fā)酵產(chǎn)物。通過安裝瘤胃瘺管方便動(dòng)態(tài)采集瘤胃液,同時(shí)采集頸靜脈血液分析其中長(zhǎng)鏈脂肪酸組成,研究瘤胃代謝產(chǎn)生的長(zhǎng)鏈脂肪酸被吸收進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)后的組成情況。與低精料相比,高精料
5、日糧條件下瘤胃pH值顯著較低,同時(shí)高精料日糧在瘤胃內(nèi)產(chǎn)生較多的氨氮(2h,p<0.05;4h,p<0.05),卻沒有能夠被微生物充分用于合成更多的微生物粗蛋白(p>0.05);高精料組產(chǎn)生更多的丙酸(2、4、6h,p<0.05),高精料組的乙酸產(chǎn)生僅在1h顯著低于低精料組的,其余時(shí)間點(diǎn)兩組之間無顯著差異,兩組間的丁酸含量差異不顯著(p>0.05)。高精料組瘤胃內(nèi)c9t11CLA顯著低于低精料組,高精料組t11C18∶1相對(duì)較高,但無顯著
6、差異。高精料組外周血血漿中t11C18∶1n(p<0.01)以及c9t11CLA(p<0.01)的含量均顯著低于低精料組的。結(jié)果顯示,高精料日糧引發(fā)亞急性瘤胃酸中毒,同時(shí)瘤胃內(nèi)順-9,反-11共軛亞油酸顯著較低,高精料日糧在瘤胃發(fā)酵后也未能生成較多的順-9,反-11共軛亞油酸的前提物反-11油酸。高精料血漿中順-9,反-11共軛亞油酸以及反-11油酸的含量顯著低于低精料組。結(jié)果表明,高精料日糧條件下,試驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生亞急性瘤胃酸中毒,氨氮產(chǎn)
7、生的速度超過瘤胃微生物的利用速度,同時(shí)高精料日糧并沒有產(chǎn)生更多的反-11油酸和順-9,反-11共軛亞油酸,血漿中這兩種物質(zhì)的含量顯著低于低精料組,可能不利于最終乳成份中脂肪酸組成的優(yōu)化。
3.高精料日糧對(duì)共軛亞油酸在山羊肝臟代謝及組織中沉積的影響
通過安裝肝臟血瘺管,研究營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)出肝臟前后量的變化,探索肝臟在這一過程中所起的作用。12只本地山羊安裝肝臟血管插管,被隨機(jī)分為兩組,分別飼喂高精料日糧和低精料日糧,比較進(jìn)
8、出肝臟血液中脂肪酸含量的變化情況,并比較肝臟及背最長(zhǎng)肌組織中,硬脂酰輔酶A脫氫酶的mRNA表達(dá)水平的差異。結(jié)果顯示,山羊血液中順-9反-11共軛亞油酸及反-11油酸,出肝后濃度高于進(jìn)肝前的,高精料組的順-9反-11共軛亞油酸出肝后增加的量低于低精料組,分別為1.8%和3.9%,反-11油酸兩組間相差較少,分別為2.3%和2.8%;高精料組山羊血液中反-11油酸顯著低于低精料組,但兩組間血液中順-9反-11共軛亞油酸無顯著差異。兩組山羊背
9、最長(zhǎng)肌中長(zhǎng)鏈脂肪酸的組成之間無顯著差異。高精料組肝臟中SCD的mR表達(dá)量顯著高于低精料組卻未能生成更多的共軛亞油酸,肝臟組織并不能將反-11油酸轉(zhuǎn)變成順-9,反-11共軛亞油酸,而肌肉中這一酶的mRNA表達(dá)量無顯著差異,高精料對(duì)肌肉中SCD的mRNA表達(dá)量也無影響。高精料為反芻動(dòng)物提供充足營(yíng)養(yǎng)的同時(shí),也帶來隱患,高精料日糧影響著瘤胃內(nèi)微生物生物氫化作用,使得從小腸吸收入血進(jìn)入肝臟的反-11脂肪酸含量顯著低于低精料組,未能為組織提供較高含
10、量的反-11油酸;高精料日糧條件下,肌肉組織中SCD的mRNA表達(dá)量未受影響,肌肉組織中順-9,反-11共軛亞油酸含量未受日糧影響。
4.高精料日糧對(duì)奶山羊乳脂中共軛亞油酸合成的影響
7只泌乳期莎能奶山羊,安裝瘤胃瘺管后,隨機(jī)分為兩組,分別飼喂低精料和高精料日糧,采用交叉設(shè)計(jì),兩組的瘤胃pH值始終在6.0以上,未發(fā)生瘤胃酸中毒。分析瘤胃液、血漿和乳中脂肪酸組成,結(jié)果顯示:瘤胃液中長(zhǎng)鏈脂肪酸組成情況如圖5.2所示。高精
11、料組瘤胃液中C14∶0、C16∶1、反-9油酸、反-11油酸、順-9油酸、C18∶2n6c以及順-9反-11共軛亞油酸的含量顯著高于低精料組。兩組其余檢測(cè)出的組份間沒有顯著差異。高精料組血漿中硬脂酸、順-9油酸、C20∶1、C18∶3n3、順-9反-11CLA、C20∶2、C20∶4n6、C20∶5n3、C24∶0以及C22∶6n3含量顯著低于低精料組,C18∶3n6顯著高于低精料組,其余檢測(cè)出的成份在兩組間沒有顯著差異,高精料組血漿中
12、反-11油酸略低于低精料組,但無顯著差異。高精料組乳脂含量顯著低于低精料組(p<0.01),乳糖含量顯著高于低精料組,兩組間乳蛋白及體細(xì)胞數(shù)無顯著差異。乳中長(zhǎng)鏈脂肪酸組成情況是,與低精料組相比,高精料組乳中16碳一下脂肪酸含量相對(duì)較高,其中C12∶0、C14∶0以及C16∶0含量顯著高于低精料組,另外,C18∶2n6t以及C20∶3n3含量也顯著高于低精料組;而硬脂酸、順-9油酸、C20∶0、C20∶1、C18∶3n3、c9t11CLA
13、、C20∶2、C22∶0以及C24∶0,高精料組顯著低于低精料組;其余檢測(cè)出的組分兩組間無顯著差異。高精料組乳腺組織中SCD的mRNA表達(dá)量顯著低于低精料組,又通過檢驗(yàn)乳腺組織中SCD的甲基化情況,發(fā)現(xiàn)在其啟動(dòng)子區(qū)的第15和18位的CpG島發(fā)生甲基化。高精料日糧能提供較多的能量滿足泌乳期反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需求,但卻未能有效優(yōu)化乳成份組成。
5.高精料日糧對(duì)山羊乳腺組織中SREBP-1c與脂代謝相關(guān)基因的影響
前一章的研究結(jié)
14、果顯示高精料日糧可能導(dǎo)致反芻動(dòng)物乳脂下降(MFD),本章試驗(yàn)選用8只本地泌乳期山羊,分別飼喂低精料以及高精料日糧,采集乳腺組織,分析其中與乳脂合成有關(guān)的幾個(gè)基因以及轉(zhuǎn)錄因子的mRNA表達(dá)量,如與脂質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的脂蛋白脂酶(LPL)、與脂肪酸在組織中重新合成有關(guān)的脂肪酸合成酶(FAS)以及乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、與脫飽和有關(guān)的硬脂酰輔酶A脫氫酶(SCD),參與脂肪細(xì)胞分化的過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)γ,以及調(diào)控這幾個(gè)基
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