基于轉錄水平生物標志物監(jiān)測肉羊肌肉中β2受體激動劑的研究.pdf

1、畜牧業(yè)中β2受體激動劑的濫用一直是國內外關注的熱點，目前雖然己經(jīng)建立了很多檢測藥物殘留的方法，但是新藥及逃逸藥物仍然是當前監(jiān)測的難題，因此有必要建立更為高效的方法。β2受體激動劑有共同的作用機理，研究β2受體激動劑在分子水平對生理的影響，如對基因轉錄水平的定量是一個建立該篩查方法的新方向。本論文即從尋找β2受體激動劑轉錄水平生物標志物著手，通過篩查模型的初步建立、方法學驗證、模型優(yōu)化、樣品驗證等途徑，擬找到長效、穩(wěn)定、高效的生物標志物并

2、建立監(jiān)測模型，以期為實現(xiàn)當前對該類藥物的有效監(jiān)測提供參考，主要研究內容與結果如下：
　?。?）基于靶向轉錄組學檢測β2受體激動劑方法的建立。結果顯示，基于文獻尋找基因表達水平的生物標志物不僅以區(qū)分實驗組和對照組樣品，還可對實驗組樣品的殘留水平進行界定。qRT-PCR結果表明萊克多巴胺可以影響所選9個候選基因的表達量，主成分分析、聚類分析和判別分析結果表明，該組基因可以作為確定山羊非法使用β2受體激動劑的生物標志物。對所有樣品殘留量

3、進行測定，并與qRT-PCR結果建立模型得到殘留量預測值，結果顯示殘留量預測值與實際值相關性良好，表明該組基因表達量變化特異于藥物處理。統(tǒng)計學分析表明該組基因還可以區(qū)分不同殘留水平的實驗組樣品。
　?。?）結合非靶向轉錄組學檢測β2受體激動劑方法的建立及優(yōu)化。結果顯示，結合非靶向組學方法即RNA高通量測序篩選的8個基因共17個基因的PCA、HCA和DA結果與基于文獻所選的9個基因結果相比有改善，顯示了RNA高通量測序技術在篩選目的

4、基因方面的巨大潛力，進一步說明基于文獻的靶向方法與非靶向方法相結合是尋找潛在基因表達水平生物標志物的一個理想方法。進一步通過VIP值從17個基因中篩選關鍵6個基因結果與上述17個基因結果一致，說明所選6個基因對模型影響顯著，有利于實際操作中減少操作時間和操作量，對以后的實際應用有重要意義。
　?。?）方法應用及驗證。結果顯示，所選6個基因對25個待檢樣品預判結果正確，進一步驗證了方法的正確性和有效性。另外，實驗中僅用萊克多巴胺處理