中藥提取物中胰島素受體激酶激動劑的篩選.pdf

1、目的:能直接激動胰島素受體激酶(IRTK)的非肽小分子化合物在抗糖尿病新藥和保健食品開發(fā)方面具有巨大前景。利用豐富的抗糖尿病中藥資源，應(yīng)用報告基因藥物篩選細(xì)胞模型篩選具有激活I(lǐng)RTK作用的活性部位，并進一步分離鑒定抗糖尿病的有效成分，為開發(fā)一種更安全有效的治療2型糖尿病新藥提供基礎(chǔ)。 方法:①篩選條件的優(yōu)化：通過討論不同的細(xì)胞接種量、誘導(dǎo)表達時間和檢測試劑用量、溶劑二甲亞砜用量以及中藥粗提物體系的影響，優(yōu)化篩選條件。②中藥提取庫

2、的建立：廣泛收集臨床治療糖尿病中藥，通過用藥頻率分析確定候選中藥；采用以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水為溶媒體系的系統(tǒng)溶劑法提取。③中藥提取物對Luc表達水平的影響檢測：配制不同濃度的中藥提取液作為高、中、低濃度受試樣品處理細(xì)胞，檢測Luc信號值并計算誘導(dǎo)表達率。④中藥活性部位的分離：利用硅膠柱層析分離顯效中藥提取部位。⑤中藥活性部位分離流份對Luc表達水平的影響檢測：配制不同濃度的分離流份處理細(xì)胞，檢測誘導(dǎo)表達率。⑥有效流份的鑒定

3、：采用薄層色譜法鑒定有效流份。 結(jié)果:①經(jīng)試驗，細(xì)胞接種量15,000/孔，誘導(dǎo)表達時間8h，LAR稀釋4倍使用，溶劑二甲亞砜的終濃度不超過0.1％為最佳篩選條件。中藥粗提物復(fù)雜體系對于IRTK的特異性激動劑胰島素以及特異性抑制劑AGl024對UC誘導(dǎo)表達作用無明顯干擾作用。②通過系統(tǒng)溶劑提取，建立了中藥提取庫，作為篩選源。③經(jīng)檢測，中藥TCM001、TCM002乙醇提取物能顯著升高Luc誘導(dǎo)表達水平，其誘導(dǎo)表達率分別為.2.9

4、2倍和2.58倍。⑤分離中藥TCM001乙醇提取物，得到10個分離流份。⑥檢測結(jié)果表明中藥TCM001乙醇提取物分離流份3和流份5能顯著提高Luc誘導(dǎo)表達水平，且這一作用與細(xì)胞活力變化無關(guān)。⑦薄層色譜鑒定表明分離流份3和流份5可能含有中藥TCM001主要成分2＃、4＃5＃，且這三種成分均有提高LUC誘導(dǎo)表達水平的作用。 結(jié)論:通過建立抗糖尿病中藥提取庫并篩選具有IRTK激動劑作用的活性部位，發(fā)現(xiàn)中藥TCM001乙醇提取物可能具有