南極磷蝦蝦青素酯的純化與分析.pdf

1、背景:南極磷蝦作為地球上生物量最大的物種體內(nèi)富含蝦青素和多不飽和脂肪酸。蝦青素的抗氧化活性極高,具有多種生物活性,在提高免疫力、抗菌消炎等方面均有一定成效,具有極高的研究價值。蝦青素在自然界中主要以三種形式存在,游離的蝦青素、蝦青素一酯、蝦青素二酯,其中主要形式是蝦青素一酯和蝦青素二酯,蝦青素一酯是蝦青素一邊結(jié)合脂肪酸形成的酯類,蝦青素二酯是蝦青素兩邊結(jié)合脂肪酸形成的酯類。蝦青素一酯和蝦青素二酯沒有標準品,國內(nèi)對蝦青素酯的研究還不是很成

2、熟,尤其是南極磷蝦中的蝦青素酯,亟待進行研究開發(fā)。
　　目的:本文旨在建立快速高效提取純化南極磷蝦中蝦青素一酯和蝦青素二酯的方法,并對南極磷蝦中的蝦青素一酯、蝦青素二酯進行脂肪酸結(jié)構(gòu)分析和抗氧化活性的初步分析。
　　方法:以南極磷蝦中蝦青素酯為研究對象,利用單因素實驗分別確定了蝦青素一酯和蝦青素二酯的最佳提取條件,利用柱層析分離技術(shù)對其中的蝦青素一酯及蝦青素二酯分別進行了純化,將純化后的蝦青素一酯和蝦青素二酯進行了甲酯化,后

3、將上清液進行氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用,分析其脂肪酸結(jié)構(gòu),利用DPPH·法對VE、蝦青素、蝦青素一酯及蝦青素二酯的體外抗氧化活性進行了初步的比較和分析。
　　結(jié)果
　　1利用高效薄層層析掃描技術(shù)對南極磷蝦蝦油進行了蝦青素類物質(zhì)的檢測及分析,在486nm下,分別在rf值0.25、0.39、0.76處測得蝦青素(12％)、蝦青素一酯(24%)、蝦青素二酯(64%)。
　　2針對蝦青素一酯采用不同溶劑、時間、溫度、提取次數(shù)、料液比對

4、蝦油進行單因素提取實驗,探索不同提取條件的提取效果,得到最適合南極磷蝦蝦青素一酯的提取條件:25℃下,1:20(m/v)的料液比用丙酮進行提取,提取1h,反復(fù)提取3次;對柱層析分離純化蝦青素一酯的條件進行了探索和優(yōu)化,最終采用①石油醚:乙酸乙酯10:1,②石油醚:乙酸乙酯7:1,③石油醚:乙酸乙酯4:1的流動相對粗樣進行柱層析分離純化,分離純化的蝦青素一酯采用高效薄層掃描儀檢測純度達到99.8%以上;將得到的一酯進行甲酯化,冷卻后取上清

5、進行氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用,檢測出12種脂肪酸(C12:02.39% C14:00.65% C16:04.00%C16:12.68% C16:20.57% C18:00.95% C18:12.94% C18:21.44% C18:31.09%C20:546.13%C20:5trans:9.40%C22:627.76%),其中主要脂肪酸為EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)分別占55.53%和27.76%,此外其脂肪酸構(gòu)成多為多不

6、飽和脂肪酸,占總脂肪酸的85.82%。
　　3對蝦青素二酯采用不同溶劑、時間、溫度、提取次數(shù)、料液比對蝦油進行單因素提取實驗,并探索不同提取條件的提取效果,得到最適合蝦青素二酯的提取條件:4℃下,1:10(m/v)的料液比用乙醇進行提取,提取1h,反復(fù)提取3次;對柱層析分離純化蝦青素二酯的條件進行了探索和優(yōu)化,最終采用①純石油醚,②石油醚:乙酸乙酯20:1,③石油醚:乙酸乙酯10:1的流動相對粗樣進行柱層析,分離純化后的蝦青素二酯

7、經(jīng)高效薄層掃描儀檢測,純度達到99.9%以上;將得到的二酯進行甲酯化,冷卻后取上清進行氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用,檢測出15種脂肪酸(C14:04.23% C16:06.14% C16:1(9-Z)5.07% C16:1(7-Z)0.31%C16:1(11)0.54% C16:2(9,12)1.12% C18:00.34% C18:1(9-E)7.15% C18:1(11-E)6.11% C18:2(8,11)2.79% C18:3(all-Z

8、,9,12,15)1.40% C20:1(11)1.38%C20:5(all-Z,5,8,11,14,17)38.46%C20:5(5,8,11,14,17)4.51% C22:620.45%),其中主要脂肪酸為 EPA和 DHA,分別占42.97%和20.45%,多不飽和脂肪酸占67.71%。
　　4利用DPPH法對南極磷蝦中的蝦青素一酯、蝦青素二酯、蝦青素和VE的體外抗氧化活性進行了初步的對比和分析,實驗結(jié)果顯示蝦青素一酯和二