共軛亞油酸對(duì)TLR4信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一種天然的功能性脂肪酸,具有減少體脂、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能、改善胴體性狀等特殊生理功能,尤其可提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力,因而受到廣泛的關(guān)注。Toll樣受體是連接機(jī)體固有免疫與獲得性免疫的紐帶,在抗感染和免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用,而有關(guān)CLA對(duì)TLR4及其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)報(bào)道較少。本試驗(yàn)分別在動(dòng)物與細(xì)胞水平上進(jìn)行了研究,旨在通過研究CLA對(duì)TLR4信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響

2、,進(jìn)一步闡明CLA免疫調(diào)控機(jī)制。
　　 (一)動(dòng)物試驗(yàn)60只SPF級(jí)22-23g雄性昆明小鼠,隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,分別飼喂添加1％CLA和1％大豆油的小鼠飼料。試驗(yàn)期30d后通過給小鼠腹腔注射細(xì)菌內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)(4 mg/kg)建立免疫應(yīng)激模型,分別于0h、1.5h、3h、6h、12h采集小鼠脾臟,采用RT-PCR分析其TLR4(Toll-Like Receptor4)、MyD88(m

3、yeloid differentiation factor88)、TRIF(TIR-domain-containing adapter-inducinginterferon-β)、NFκB-p65(nuclear factor kappa-light-chain—enhancer of activated B cells)的表達(dá)水平。試驗(yàn)結(jié)果表明:注射LPS后上述各基因表達(dá)量升高,均在6h達(dá)到峰值。試驗(yàn)組脾臟TLR4、MyD88、TRI

4、F的mRNA表達(dá)量低于對(duì)照組,在6h時(shí)達(dá)到顯著效果(P<0.05),但NFκB-p65的顯著效果(P<0.05)出現(xiàn)在3h時(shí)。
　　 (二)細(xì)胞試驗(yàn)設(shè)置空白對(duì)照組(DMSO)、低劑量組(50μmol/L CLA-DMSO)、高劑量組(100μmol/L CLA-DMSO)的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞,培養(yǎng)24h后加入LPS(100ng/mL)誘發(fā)產(chǎn)生免疫反應(yīng),分別于0h、2h、4h、8h后收集細(xì)胞,采用R