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文檔簡介
1、本試驗以1日齡海蘭褐雛雞空腸和回腸組織為研究對象,利用RT-PCR的方法檢測雛雞空腸、回腸、十二指腸和盲腸組織中pIgR mRNA的表達量;利用分子克隆技術,在體外克隆兔抗雛雞pIgR多克隆抗體;通過口服腸炎沙門氏菌(Salmonella Enteritidis,SE)的方法感染雛雞,于感染后的1d、3d、7d和14d,利用熒光定量PCR的方法檢測雛雞空腸和回腸組織中TLR4信號通路中TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB和pIg
2、R mRNA的表達量;Western Blot檢測雛雞空腸和回腸組織中pIgR蛋白表達水平;旨在探討SE對TLR4信號通路調(diào)節(jié)雛雞pIgR的影響,結(jié)果表明:
(1)利用原核表達載體融合雛雞pIgR蛋白,免疫雄性新西蘭大白兔,成功制備了兔抗雛雞pIgR多克隆抗體。
(2) SE感染雛雞空腸組織,實驗組TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB和pIgR mRNA表達在1d開始上調(diào),且NF-κB mRNA表達明顯升高(
3、P<0.05);到第3d時,將實驗組和對照組對比發(fā)現(xiàn),TLR4 mRNA表達量明顯上調(diào)(P<0.05),pIgR mRNA表達量明顯提高(P<0.01);隨后基因表達開始下調(diào),至第14d,實驗組和對照組中TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB和pIgR mRNA表達量差異不顯著。結(jié)果表明,雛雞感染SE后,TLR4信號通路被激活,且空腸組織中pIgR mRNA的表達量升高。
(3) SE感染雛雞回腸組織,實驗組TLR4、T
4、RAF6、MyD88、NF-κB和pIgR mRNA表達量在1d開始上調(diào),且NF-κB mRNA表達量升高(P<0.05);到第3d時,將實驗組和對照組對比發(fā)現(xiàn),TLR4、MyD88和pIgR mRNA表達量極顯著升高(P<0.01),而TRAF6 mRNA表達量明顯提高(P<0.05);隨后基因表達量開始下調(diào),至14d時,實驗組和對照組中TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB和pIgR mRNA表達量差異不顯著。結(jié)果表明,雛雞感
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