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1、哺乳動(dòng)物乳腺脂肪合成的機(jī)制仍然還有許多未知之處,近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)在食物中添加油脂,特別是共軛亞油酸,對(duì)于哺乳動(dòng)物乳腺脂肪合成具有調(diào)節(jié)作用。因此本試驗(yàn)就通過(guò)在奶牛和小鼠日糧中加入共軛亞油酸研究其對(duì)于乳腺的脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控。分為以下五個(gè)部分:
(1)試驗(yàn)采用熒光定量PCR檢測(cè)了泌乳小鼠乳腺中與脂肪合成和分泌相關(guān)的20個(gè)基因的mRNA豐度和表達(dá)差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乳腺中脂肪酸攝取的基因(LPL)、羧化酶(ACACA)、脫氫酶(
2、SCD)和脂肪滴形成蛋白(XDH,BTN1A1,ADFP)都具有高mRNA表達(dá)豐度(>5%),CD36,FASN和AGPAT6具有中等mRNA表達(dá)豐度(>1%),與妊娠期乳腺的基因表達(dá)相比,這些基因mRNA的表達(dá)均有顯著上調(diào)。調(diào)節(jié)因子中SREBF基因的mRNA具有中等的表達(dá)豐度(2.22%),并且在泌乳期mRNA的表達(dá)有10倍上調(diào),而PPARγ基因的mRNA表達(dá)豐度很低(0.02%),并且與妊娠期相比mRNA的表達(dá)沒(méi)有顯著變化。
3、 (2)CLA能夠降低乳脂肪的合成,但其中的機(jī)制并不清楚。因此試驗(yàn)選取了16頭泌乳中期的奶牛,分為對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧),共軛亞油酸鈣低劑節(jié)組(基礎(chǔ)日糧+50g/頭/天),中劑量組(基礎(chǔ)日糧+100g/頭/天),高劑量組(基礎(chǔ)日糧+200g/頭/天),試驗(yàn)共進(jìn)行14天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)日糧中添加共軛亞油酸鈣對(duì)于奶牛的乳產(chǎn)量、乳蛋白和乳糖沒(méi)有影響,但是顯著降低了乳脂肪的含量,對(duì)照組奶牛乳脂肪含量為3.54 g/100ml,共軛亞油酸鈣低、中和高
4、劑量組奶牛乳脂肪含量分別為2.94 g/100l、2.58 g/100ml和2.21g/100ml。檢測(cè)脂肪酸組成發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,共軛亞油酸鈣組奶牛乳汁的中、短鏈脂肪酸(C6、C10、C12、C16)含量顯著降低(P<0.05),而長(zhǎng)鏈脂肪酸(C18、c18:1)的含量有顯著增加(P<0.05)。計(jì)算脂肪酸產(chǎn)量,發(fā)現(xiàn)添加共軛亞油酸鈣顯著降低各種脂肪酸的產(chǎn)量(P<0.05)。
(3)試驗(yàn)選取了8頭泌乳中期的奶牛隨機(jī)分為2組
5、飼喂不同日糧,分別是對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧+棕櫚酸鈣200g/頭/天),共軛亞油酸鈣組(基礎(chǔ)日糧+共軛亞油酸鈣200g/頭/天),試驗(yàn)共進(jìn)行14天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,日糧中添加共軛亞油酸鈣對(duì)于奶牛乳蛋白、乳糖含量沒(méi)有顯著影響,但是顯著降低了乳脂肪含量,對(duì)照組奶牛乳脂肪含量為3.26g/100ml,共軛亞油酸鈣組奶牛乳脂肪含量為2.44 g/100ml。檢測(cè)脂肪酸組成發(fā)現(xiàn)共軛亞油酸鈣顯著降低了乳汁的中、短鏈脂肪酸(C6、C8、C10、C16
6、)含量(P<0.05),而顯著增加了長(zhǎng)鏈脂肪酸(C18、C18:1、C18:2)的含量(P<0.05)。計(jì)算脂肪酸產(chǎn)量,發(fā)現(xiàn)添加共軛亞油酸鈣顯著降低各種脂肪酸的產(chǎn)量。對(duì)奶牛乳腺脂肪合成基因表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),CLA顯著降低了乳腺組織脂肪合成酶(ACACA、FASN、SCD、LPL)基因的表達(dá),并且也抑制了調(diào)節(jié)岡子SREBF和INSIG1的基因表達(dá),這些結(jié)果表明CLA處理能夠抑制乳腺組織對(duì)于外源性脂肪酸的攝取和細(xì)胞的自身合成,在這其中SREBF
7、可能起到主要作用。
(4)試驗(yàn)選取泌乳昆明鼠在12 h光照和12 h黑暗的條件下喂養(yǎng),環(huán)境溫度20~25℃,隨機(jī)分為對(duì)照組(2%花生油):低劑量組(0.5%CLA+1.5%花生油);中劑量組(1%CLA+1%花生油);高劑量組(1.5%CLA+0.5%花生油),每組6只。母鼠分娩當(dāng)天起將每窩仔鼠一律調(diào)整為8只,并白分娩當(dāng)天起每天按時(shí)記錄每組母鼠體重,母鼠采食量及仔鼠窩重至泌乳第14天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CLA飼喂期間母鼠的體重沒(méi)有
8、顯著變化,但采食量顯著降低。仔鼠的體重在出生時(shí)沒(méi)有差異,隨著試驗(yàn)的進(jìn)行,高劑量組仔鼠的窩重增加緩慢,從第8天開始顯著低于對(duì)照組(P<0.01),到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)照組仔鼠窩重為67.93g,而對(duì)照組為51.82 g(P<0.001),高劑量組母鼠的泌乳鼙和乳汁乳脂肪含量與對(duì)照組相比也有顯著降低,而乳蛋白和乳糖的含量沒(méi)有顯著差異。檢測(cè)乳腺脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,高劑量組母鼠乳腺組織的SCD、LPL、FASN、ACACA基因表
9、達(dá)顯著降低(p<0.05),并且調(diào)節(jié)因子SREBF、INSIG1、PPARγ和PPARGC1a mRNA的表達(dá)也顯著下調(diào)。
(5)試驗(yàn)將泌乳鼠隨機(jī)分為1.5%亞油酸組(對(duì)照組)、1.5%CLA組(試驗(yàn)組),每組6只,從第4天飼喂日糧至第15天,結(jié)果發(fā)現(xiàn)母鼠采食量和仔鼠窩重與對(duì)照組相比有顯著降低(P<0.05),CLA組母鼠的泌乳量顯著減少,但是乳腺和肝臟的重量沒(méi)有顯著差異(P>0.05),檢測(cè)母鼠血液發(fā)現(xiàn),CLA組母鼠血液
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