嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶基因的表達(dá)研究.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)是一類在9-與11-位、10-與12-位或11-與13-位碳原子處有順式或反式共軛雙鍵的十八碳二烯酸。在共軛亞油酸的各種異構(gòu)體中，只有c9，t11-18:2和t10，c12-18:2兩種異構(gòu)體具有多種生理活性，如抗癌、抗粥狀動(dòng)脈硬化、抗氧化、降低膽固醇、減肥、促進(jìn)生長(zhǎng)等，因而在食品、保健品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。一些微生物可以產(chǎn)生共軛亞油酸異構(gòu)酶(Co

2、niugatedlinoleic acid isomerase)，該酶能專一性地催化亞油酸轉(zhuǎn)化為活性共軛亞油酸異構(gòu)體的反應(yīng)，因此近幾年來倍受關(guān)注，利用生物法制備共軛亞油酸已成為今后共軛亞油酸工業(yè)合成的發(fā)展趨勢(shì)。 本文首先利用Blast(NCBI)、Bioediter等生物學(xué)軟件，根據(jù)已公布的嗜酸乳桿菌NCFM基因組序列和羅伊氏乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶的核苷酸序列，預(yù)測(cè)了嗜酸乳桿菌中共軛亞油酸異構(gòu)酶的序列。之后根據(jù)所預(yù)測(cè)的嗜酸乳桿菌

3、共軛亞油酸異構(gòu)酶基因序列以及載體pET30a(+)的物理圖譜設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，對(duì)嗜酸乳桿菌AS1.1854基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到一條1776bp的目的條帶，并構(gòu)建了pET30a(+)/共軛亞油酸異構(gòu)酶重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入表達(dá)載體大腸桿菌BL21(DE3)ptYS中。 通過對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，采取誘導(dǎo)溫度16℃，誘導(dǎo)劑IPTG濃度0.1mmol/L，對(duì)含有重組質(zhì)粒的BL21(DE3)pLYS進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，首次表達(dá)出了可溶性的